Metabolismo De Carbohidratos En
Enviado por angiepogy • 8 de Marzo de 2015 • 785 Palabras (4 Páginas) • 363 Visitas
UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C.
Facultad de Ciencias Químicas
Materia: BIOQUIMICA METABOLICA Clave: BI050308
PRÁCTICA NO. 4
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS EN SEMILLAS Carrera: LQA
En vigor: 2011
Escrita por:
DRA. MARÍA DEL ROSARIO AYALA MORENO Revisada y Aprobada por:
QFB LORENA CASSíS NOSTHAS Substituye a: Versión 2012
Próxima revisión: 2013
1. Objetivo.
1.1. Demostrar que las modificaciones del metabolismo que ocurren durante la germinación de las semillas de ajonjolí, provoca la transformación de los lípidos en sacarosa.
1.2. Contrastar el metabolismo de lípidos y carbohidratos en el humano y en las semillas de ajonjolí.
2. Reactivos.
Mezcla de cloroformo-metanol 2:1
Solución de fenol al 5%.
H2SO4 concentrado.
Solución amortiguadora de fosfatos 0.1M, pH 7.5, 3mM de MgCl2.
Solución patrón de glucosa 200 g/mL.
Solución de hipoclorito de sodio al 1%.
3. Material.
Gasa ó manta de cielo.
4 frascos de vidrio de boca ancha.
Ligas.
Una bandeja de plástico
6 tubos cónicos 15 mL
1 baño María
4. Material biológico.
Semillas de ajonjolí germinadas y sin germinar.
5. Metodología.
5.1. Fase A. Germinación de las semillas.
1.1.1. Pesar 4 lotes de semillas de ajonjolí de 5 g cada uno.
1.1.2. Lavar las semillas con 50 ml de solución de hipoclorito de sodio y enjuagarlas con agua previamente hervida y enfriada (puede usarse agua destilada).
1.1.3. Colocar en cada uno de dos frascos de boca ancha, 5 g de semillas y taparlos con 2 capas de gasa que sostendrá con una liga a la boca del frasco. Guardar los dos lotes de semillas restantes.
1.1.4. En una bandeja con un poco de agua colocar los dos frascos boca abajo. Mantener los frascos en la bandeja con agua durante 4 días tapados con papel aluminio, a temperatura ambiente.
5.2. Fase B. Preparación de los extractos.
5.2.1. Homogeneizar en un mortero a baja temperatura (colocar en hielo), 5 g de semillas germinadas, y por separado, 5 g de semillas sin germinar; cada lote con 10 mL de solución amortiguadora de fosfatos, pH=7.5, MgCl2 3mM.
5.2.2. Centrifugar a 15,000 rpm durante 15 min. Si es necesario, filtre los sobrenadantes a través de varias capas de papel filtro, para obtener filtrados claros. Guarde los extractos en frío mientras se utilizan.
5.3. Fase C. Determinación de Carbohidratos.
Prepare 10 tubos como se indica en el siguiente cuadro:
CURVA PATRÓN MUESTRAS PROBLEMA
Tubos
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Sol.patrón de glucosa
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
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---
---
Agua destilada
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Extracto de enzima SIN GERMINAR
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