METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS.

1. OBJETIVOS

• Aprender a identificar a las bacterias de acuerdo a las reacciones metabólicas que tienen frente a los diferentes reactivos o medios de cultivo.

1. FUNDAMENTO

del medio de cultivo tsi.- se basa en la utilizacion de medios de cultivos apropiados para la identificacion de bacterias gram negativas patogenas.

1. MARCO TEÓRICO

El conocimiento de la actividad bioquímica de la bacteria es indispensable para una adecuada caracterización de la especie. En los cultivos bacterianos diferentes pueden tener las características morfológicas y culturales muy similares pero se diferencian por sus reacciones metabólicas.

Los resultados positivos o negativos del ensayo se verificará mayormente con el cambio de color del medio o algún otro cambio en el aspecto del indicador utilizado.

METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS

La desintegración de los carbohidratos que realizan los microorganismos se ve acompañada de la aparición de una reacción ácida. Los fermentos que desintegran a los carbohidratos efectúan la hidrólisis de este hasta convertirlo en glucosa o en otro monosacárido, de esta manera bajo la acción de la maltosa, la sacarosa y la lactosa los disacáridos que penetran en el interior del cuerpo bacteriano sufren hidrólisis y desintegración de los polisacáridos y disacáridos en monosacáridos.

En cuanto a la temperatura, es posible distinguir una temperatura mínima de crecimiento, que es la temperatura más baja a la que la especie puede crecer, una temperatura óptima de crecimiento, que es aquella en la que el crecimiento es mejor, más rápido y abundante, y una temperatura máxima de crecimiento, que es la temperatura más alta que tolera ese microorganismo. De acuerdo con la temperatura óptima de crecimiento, los microorganismos pueden agruparse como se describe a continuación.

1. PARTE EXPERIMENTAL

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

• Aguja de Kolle
• Asa de Kolle
• Espátula Drigalsky
• Pipeta volumétrica 1 ml
• Tubos de ensayo
• Pinzas
• Gradilla
• Placas Petri
• Trípode
• Recipientes de metal
• Mechero de Bunsen

• Estufas a 18 °C, 37 °C y 43°C
• Refrigeradora a 5 °C

• Medios de cultivo (Caldo nutritivo, Agar nutritivo, Agar Mueller-Hinton)
• Disco antibiótico “Cefoperazona” (75 μg/disco)
• Cepa de trabajo:

• Escherichia coli
• Salmonella typhi

EFECTO DE LOS AGENTES FÍSICOS SOBRE EL DESARROLLO MICROBIANO

TEMPERATURA

Determinación de temperatura óptima, mínima y máxima de desarrollo microbiano:

• Sembrar en 4 tubos con Agar nutritivo pequeños inóculos de una cepa joven (Escherichia coli).
• Incubar por separado en estufas reguladas a temperaturas perfectamente controladas (5 °C, 18°C, 37 °C y 43 °C) de 24 horas a 48 horas.
• Leer la forma y cantidad que aparece en los tubos.

Resultados:

POTENCIAL DE HIDRÓGENO (pH)

Determinación de pH óptimo de desarrollo microbiano:

• Sembrar en 6 tubos con Caldo nutritivo, ajustados a un pH conocido (4, 5, 6, 7, 8 y 9), pequeños inóculos de una cepa joven (Escherichia coli).
• Incubar todos los tubos a 37 °C de 24 horas a 48 horas.
• Leer la forma y cantidad que aparece en los tubos.

Resultados:

RESISTENCIA AL CALENTAMIENTO

• Sembrar en  5 tubos con Caldo nutritivo, alícuotas de 0,1 ml de una cepa joven (Escherichia coli).
• Calentar en baños de agua, reguladas a temperaturas controladas (60 °C, 70 °C, 80 °C, 90 °C y 100 °C), cada uno de los tubos por un periodo de 10 minutos.
• Enfriar los tubos al chorro de agua corriente.
• Incubar todos los tubos a 37 °C de 24 horas a 48 horas.
• Leer la forma y cantidad que aparece en los tubos.

Resultados:

...