Microscopia

OBJETIVO: Analizar los conceptos básicos referentes a la Microscopía.

MICROSCOPÍA

Es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal. Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopía, el uso del mismo se requiere para producir las imágenes adecuadas, de todo un conjunto de métodos y técnicas afines pero extrínsecas al aparato. (Montalvo, 2010)

Es un hecho evidente que toda persona que desee convertirse en microscopista experto, y que piense usar el microscopio como un auxiliar en sus análisis, solo obtendrá un rendimiento adecuado de este uso, si previamente adquiere unos conocimientos suficientes sobre las estructuras de los materiales biológicos e inorgánicos cuya caracterización microscópica es habitual.(Wallis,1968)

Microscopio

Es un instrumento para observar objetos pequeños. La palabra microscopio se deriva del antiguo griego micros, pequeño y skopein, observar.

Todos los microscopios tienen una cosa en común: contienen una o más piezas denominadas lentes. Se llama lente un trozo de una sustancia transparente con una forma definida para desviar los rayos de la luz que la cruza. La mayor parte de los lentes son de cristal, pero pueden hacerse de agua, de aceite o de plástico transparente. (Keen, 2005)

Cuando vemos un objeto es porque nuestros ojos recogen la luz refleja. Si los rayos de luz son recibidos de un modo directo, vemos el objeto con su tamaño natural; pero si los rayos que reciben nuestros ojos sufren primero cierta desviación, el objeto nos parecerá de mayor tamaño. Cuando esto ocurre, decimos que la imagen del objeto ha sido ampliada. (Keen, 2005)

Historia del Microscopio

La historia del microscopio se inicio en el siglo XVI, con Benedetto Rucellai, quien escribe en uno de sus pequeños poemas las observaciones realizadas sobre abejas seccionadas con la ayuda de un espejo cóncavo.

1590: En Midelburg (Holanda), Juan y Zacharias Janssen construyen el que sería el primer microscopio compuesto de la historia de una simplicidad absoluta el mismo consistía en dos lentes soportados en sendos tubos de latón de unos 25 cm de largo que se deslizaban (facilitando el enfoque) dentro de otro.

1612: Galileo Galilei incursiona en el trabajo con lentes. Ya lo había hecho con los telescopios y los microscopios no quedaron al margen de su creatividad. Es así que fabrica uno de pequeño tamaño (unos 12 cm) instalando dos lentes en sendos tubos de madera que se deslizaban dentro de uno exterior de cartón al que se le practicaron terminaciones en cuero al estilo de la época.

1668: Eustacchio Divini, en Bologna (Italia), desarrolla un microscopio compuesto de mayor porte. El sistema estaba basado en tubos telescopados. En la parte superior del mismo colocó dos lentes enfrentados desde su lado convexo; mientras que, en la parte inferior ubicó un lente montado sobre madera. La estructura estaba sostenida sobre un pie metálico.

Los primeros grandes avances en la ciencia y en particular en las ciencias biológicas, se deben en parte a la invención del microscopio óptico, cuando a finales del siglo XVII Anton van Leeuwenhoek, tallando lentes, pudo apreciar el mundo que por su tamaño tan pequeño no era posible ver a simple vista: el mundo microscópico.

1670: Christopher Cock y Robert Hooke uno aportando la construcción y el otro el diseño, son los responsables de la creación de un microscopio compuesto de 50 cm con el que Hooke logró observar celdillas de corcho a las que denominó "célula", instaurando por primera vez el uso de esta palabra.

Siglo XX: El microscopio va a conservar sus características generales. Pequeñas modificaciones solo mejoran algunas prestaciones sin apartarse de la esencia alcanzada. Alguna de éstas, fueron la incorporación de un carro para desplazar la muestra sobre la platina, el sistema eléctrico de iluminación incorporado, etc. En la actualidad, la utilización de Microscopios Electrónicos de Transmisión y los de Barrido han permitido obtener imágenes de gran resolución en materiales pétreos, metálicos y orgánicos. (Gómez, 2006)

TIPOS DE MICROSCOPIOS

El microscopio óptico: es un instrumento que sirve para aumentar el tamaño de un objeto a través de un sistema de lentes. Puede conseguirse con este método un aumento de hasta 2000 veces.

Las partes de las que se compone un microscopio se pueden dividir en parte mecánica y en parte óptica.

Parte mecánica:

Sistema de soporte:

 Pie: Sirve de apoyo y para darle estabilidad al microscopio. En él está integrada la fuente luminosa.

 Brazo: Es una columna que parte del pie sirve para sujetar el tubo. Puede ser recto o arqueado.

 Tubo: Es una cámara oscura que está unida al brazo. En su parte inferior está el revólver son los objetivos y en su parte superior los oculares.

 Platina: Es una plataforma horizontal sobre la que se engancha con dos pinzas el portaobjetos. Tiene en su zona central un orificio que permite el paso de la luz y un sistema de cremallera manejado por dos tornillos que permiten el movimiento de la muestra.

 Revolver: Sujeta los objetivos y gira para permitir el cambio de objetivo.

Sistema de ajuste:

 Tornillo macrométrico: Tornillo de enfoque que mueve la platina hacia arriba y hacia abajo de forma brusca y poco precisa.

 Tornillo micrométrico: Tornillo de enfoque que mueve la platina hacia

arriba y hacia abajo de forma lenta y muy precisa.

Parte óptica:

 Fuente de iluminación: Es una lámpara halógena que permite el encendido o el apagado con un interruptor y cuya intensidad puede ser graduada. Puede tener en su parte superior un anillo para permitir la colocación de filtros que facilitan la visualización.

 Condensador: Es un sistema de lentes situado bajo la platina que permite concentrar la luz de la fuente de iluminación hacia la preparación.

 Diafragma iris: Está en el interior del condensador y sirve para limitar el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado desviados (regula la luz y ajusta la apertura numérica).

 Oculares: Están colocados en la parte superior del tubo y su función es captar y ampliar la imagen obtenida por los objetivos. Actualmente se suelen usar los microscopios binoculares que tienen dos oculares unidos por un mecanismo que permite ajustar la separación interpupilar. Son normalmente de x10 y x12.

 Objetivos: Están colocados en la parte inferior del tubo insertados en el revólver y obtienen la imagen real aumentada e invertida. Sobre su superficie está indicado su aumento y su apertura numérica. Suelen llevar dibujado un anillo de color que indica su aumento y suelen ser de x4 (rojo), x10 (amarillo), x40 (azul) y x100 (blanco).

( AcuaNatura, 2007)

 Microscopio óptico compuesto

Un microscopio compuesto tiene dos lentes o sistemas de lentes, el objetivo, situado cerca del objeto que se observa, y el ocular, que está colocado cerca del ojo. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite al ocular, donde se realiza el aumento final. El aumento total de un microscopio compuesto es el producto del aumento de su objetivo y de su ocular.

Con un objetivo que aumenta x40 y un ocular que aumenta x10 el aumento total es de x400. El microscopio compuesto es pues capaz de conseguir aumentos considerablemente mayores que el microscopio construido con una sola lente.

 Microscopio óptico de contraste de fases

El microscopio de contraste de fases hace posible ver fácilmente pequeñas células, incluso sin teñir. Las células tienen un índice de refracción distinto de su alrededor y esta diferencia puede utilizarse para crear una imagen de mucho mayor contraste que la que puede obtenerse con el microscopio óptico normal.

 El microscopio óptico de campo oscuro

El microscopio de campo oscuro es un microscopio óptico ordinario cuyo sistema condensador ha sido modificado para dirigir la luz a la preparación desde los lados de tal modo que sólo la luz difractada por la preparación pasa al ocular y se hace visible. A causa de esta disposición la muestra aparece iluminada sobre un fondo oscuro. La microscopia de campo oscuro ha posible la observación en estado vivo de partículas y células que de otra manera estarían por debajo de los límites de resolución del microscopio óptico, aunque resulten visibles pocos detalles estructurales. La microscopia de campo oscuro ha sido ampliamente usada en el estudio de pequeñas células móviles tales como Treponema pallidum.

 El microscopio óptico de fluorescencia

Se utiliza para poner de manifiesto muestras que tienen fluorescencia, bien a causa de la presencia en su interior de sustancias materiales

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