PRACTICA DE LAB-PERFIL DE LIPIDOS

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RESUMEN

Se analizó una muestra de sangre humana, procedente de un paciente ambulatorio, la cual, con el debido manejo y empleo de las medidas adecuadas se adquirió para su análisis; Se prosiguió con el análisis de un perfil lípidico, mismo que desglosa un examen químico (constituido por la determinación de glucosa, triglicéridos, colesterol total y lipoproteínas: HDL, LDL y VLDL).

Los resultados obtenidos en cada uno de los exámenes realizados, se encontraron dentro de los valores de referencia.

INTRODUCCIÓN

DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS

Más de 90% de los triglicéridos provienen de la dieta y constituyen cerca del 95% de la grasa almacenada en los tejidos. Debido a que son insolubles en agua,constituyen el principal éster de glicerol plasmático.  

Esta prueba sirve para valorar la sospecha de ateroesclerosis y cuantifica la capacidad del organismo para metabolizar la grasa.  Cuando hay elevación de los triglicéridos combinada con elevación del colesterol, se considera un factor de riesgo para ateroesclerosis.

Para establecer el diagnóstico de hiperlipoproteinemia primaria o secundaria es muy útil la cuantificación de triglicéridos en conjunto con otros lípidos. También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endócrinos (gota).

PRINCIPIO

Los triglicéridos del suero son hidrolizados a glicerol y ácidos grasos libres por acción de la lipasa.  En presencia de ATP y glicerolcinasa (GK), el glicerol es convertido a glicerolfosfato el cual enseguida es oxidado por la glicerolfosfato oxidasa (GPO) para producir peróxido de hidrógeno.  La condensación de éste último con el DHBS y 4-aminoantipirina (4-AAP) en presencia de peroxidasa, produce un cromógeno rojo que absorbe a 515 nm.

lipasa

Triglicéridos -------------------- Glicerol + ácidos grasos

GK

Glicerol + ATP ------------------ Glicerol-fosfato + ADP

GPO

Glicerol-fosfato + oxígeno ----------------- H2O2 + fosfato de dihidroxiacetona

Peroxidasa

H2O2 + 4-AAP + DHBS -------------------- Cromógeno + HCl + 2 H2O

El incremento en la absorbancia debido a la formación del cromógeno es directamente proporcional a la concentración de triglicéridos en la muestra.

MUESTRA

Puede emplearse SUERO o PLASMA fresco, claro y no hemolizado.  La muestra debe ser colectada seguida de un ayuno de 12 horas (si hay antecedentes de hiperlipoproteinemia, ayuno mínimo de 14 horas, no ingiriendo grasas en la cena) y el suero separado del coágulo lo más rápido posible.

La heparina y el EDTA son los anticoagulantes de elección.  No deben usarse anticoagulantes de floruro y oxalato.  

Los triglicéridos son estables por 10 días a 2 – 8º C.  No deben dejarse las muestras a temperatura ambiente (20 – 25º C), ya que los fosfolípidos pueden hidrolizarse liberando glicerol libre, falseando los resultados.

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL

El colesterol es una sustancia hidrófoba y por lo tanto insoluble en plasma sanguíneo, que se encuentra en sangre, bilis y tejido cerebral y  sirve como precursor de ácidos biliares, esteroides suprarrenales, hormonas sexuales  y vitamina D.  Su circulación sistemática es posible gracias a la formación de complejos solubles por su unión con lipoproteínas séricas entre las que las LDL (lipoproteínas de baja densidad) representan el mayor porcentaje.  Es en el hígado en donde se produce la incorporación del colesterol y otros lípidos a las lipoproteínas, así como donde se esterifica la mayor parte del colesterol con ácidos grasos.

Un nivel elevado de colesterol en suero es un factor asociado con una elevada incidencia de los transtornos cardiovasculares.  Variaciones fisiológicas del colesterol dependen de la dieta, edad, sexo; embarazo y después del parto.  Variaciones patológicas coinciden a menudo con lipemia, pero otras veces es discordante.

PRINCIPIO

Los ésteres de colesterol son hidrolizados por la enzima colesterol estearasa (CE), liberando colesterol y ácidos grasos; por una posterior oxidación enzimática del colesterol mediante la colesterol oxidasa (CO), se obtiene colestén-3-ona con producción simultánea de peróxido de hidrógeno.  Éste último se une con la 4-aminoantipirina (4-AAP) y con parahidroxibenzoato en presencia de peroxidasa para producir un cromógeno con absorbancia máxima a 505 nm.

CE    

Ésteres de colesterol -------------------- Colesterol + ácidos grasos  

CO

Colesterol + oxígeno -------------------- Colesten-3-ona + H2O2

peroxidasa

2 H2O2 + 4-AAP + parahidroxibenzoato ------------------ Cromógeno + 4 H2O

La intensidad del color producido es directamente proporcional a la concentración de colesterol en la muestra.

MUESTRA

Se emplea SUERO o PLASMA, recolectado con heparina o EDTA.  La muestra deberá ser tomada después de un ayuno de 12 horas.

Las muestras para ensayo de colesterol son estables durante 1 semana a 2 – 8º C y por 4 semanas a –20 – 0º C.

DETERMINACIÓN DE HDL-COLESTEROL

FUNDAMENTO

La separación del HDL-colesterol, está basada en la selectividad de los iones fosfotungstico y magnesio para precipitar todas las Lipoproteínas con excepción del HDL-colesterol. . Después de la centrifugación, el HDL-colesterol contenido en el líquido sobrenadante, se determina con el mismo método que se determinó el colesterol total.

RECOLECCIÓN DE MUESTRA PARA LA DETERMINACIÓN DE UN PERFIL LIPÍDICO

Preparación del paciente:
a) No se debe variar los hábitos alimenticios durantes 3 días.

1. Tener un peso corporal estable
2. Ayuno de 12 a 16 horas
3. No consumir alcohol 72 horas antes del día de la toma de muestra.
   

Técnica de extracción de sangre:

Un método conveniente consiste en tener al paciente sentado, sujeto a un mínimo de tensiones y extraer la muestra de la vena ante cubital. Si se emplea torniquete se aconseja retirarlo antes de la extracción ya que se ha informado de que el uso prolongado produce aumento en los valores lipiditos.

Elección del plasma o suero:
Para el análisis químico de lípidos y lipoproteínas se prefiere generalmente plasma. El anticoagulante aconsejado es EDTA sólido (1 mg/ml de sangre) y las células sanguíneas deben separase tan pronto como sea posible.

Conservación de las muestras:
Si no se va a realizar rápidamente las determinaciones de lípidos se recomienda la congelación de las muestras las muestras se han de analizar en unos pocos días es suficiente su refrigeración a 4 c. si la conservación no es a corto plazo las muestras deben ser congeladas.

Venopunción

La mayoría de las veces, la sangre se extrae de una vena localizada en la parte interior del codo o el dorso de la mano. 

1. El sitio se limpia con un desinfectante (antiséptico).
2. Se coloca una banda elástica alrededor de la parte superior del brazo con el fin de aplicar presión en el área. Esto hace que la vena se llene de sangre.
3. Se introduce una aguja (la cual se encuentra unida con el sistema de extracción) en la vena, cerciorándose de colocar el bisel hacia arriba.
4. Una vez que esté seguro de estar en vena, introducir el tubo de recolección sosteniendo firmemente con una mano y con la otra insertar el tubo al vacío, llenar y retirar cuantos tubos se requiera.
5. Para concluir con la toma de muestra, soltar el torniquete y por consecuente se retira la aguja cubriendo el sitio con un vendaje o torunda de algodón para detener el sangrado.

OBJETIVO

Conocer los requisitos de toma de muestra para la cuantificación de lípidos, así como también interpretar la metodología existente para su determinación (triglicéridos, colesterol total, C-HDL, C-LDL y C-VLDL).

Así mismo, bajo el examen químico, se llevará de forma práctica la determinación de la concentración de lípidos (cuantificación de lipoproteínas) en un paciente ambulatorio.

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