PRÁCTICA NÚMERO 7: ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

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UNIVERSIDAD DE SONORA

DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA II

PRÁCTICA NÚMERO 7: ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA.

SOBERANES FIMBRES GRECIA C.

NAVARRO CHEW AYLIN

MOYA AYALA JESÚS ESTEFANIA

PERAZA SALDAÑA ELDUIN ALEJANDRO

INTRODUCCIÓN:

La espectrometría de fluorescencia (también llamada fluorometría o espectrofluorimetría) es un tipo de espectroscopia electromagnética que analiza la fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz ultravioleta, que excita los electrones de las moléculas de ciertos compuestos y provoca que emitan luz de una menor energía, generalmente luz visible (aunque no necesariamente).Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluorómetros o fluorímetros.

MARCO TEÓRICO:

Las moléculas tienen varios estados referidos a los niveles de energía. La espectroscopia de fluorescencia se preocupa fundamentalmente de estados electrónicos y vibratorios. Generalmente las especies estudiadas poseen un estado fundamental electrónico o estado estacionario (un bajo estado electrónico) de interés, y un estado electrónico excitado de una energía superior. Dentro de cada uno de estos estados electrónicos hay varios estados vibratorios. En espectroscopia de fluorescencia, las especies son las primeras en ser excitadas mediante la absorción de un fotón, desde su de estado electrónico fundamental, a uno de los diversos estados vibratorios en el estado electrónico excitado. Las colisiones con otras moléculas causan a la molécula excitada la pérdida de energía vibratoria hasta que alcanza el menor estado vibratorio del estado electrónico excitado. Este proceso es a menudo visualizado con el diagrama de Jablonski.

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La molécula luego vuelve a declinar a uno de los varios niveles de vibración del estado electrónico fundamental emitiendo un fotón en el proceso. Como las moléculas pueden decaer en cualquiera de los varios niveles vibratorios en el estado fundamental, los fotones emitidos tendrán entonces diferentes energías, y de este modo diferentes frecuencias. Por tanto, por el análisis de las diferentes frecuencias de luz emitidas en la espectroscopia de fluorescencia junto con sus intensidades relativas, la estructura de los diferentes niveles vibratorios puede ser determinada. Para especies atómicas, el proceso es similar, sin embargo desde especies atómicas no se poseen niveles vibratorios de energía, los fotones emitidos están con frecuencia con la misma longitud de onda que la radiación incidente. Este proceso de re-emitir el fotón absorbido es llamado “resonancia de fluorescencia “y aunque es característica de la fluorescencia atómica, se observa en la fluorescencia molecular. En un experimento típico, las diferentes longitudes de onda de luz fluorescente emitidas por una muestra se miden usando un monocromador , sosteniendo la luz excitada en una longitud de onda constante. Esto es llamado espectro de emisión. Un espectro de excitación es lo contrario, en este la luz emitida se mantiene constante en una longitud de onda, y la luz de excitación es leída a través de diferentes longitudes de onda (mediante un monocromador). Un mapa de emisión es medido mediante el registro del espectro de emisión resultante de una gama de excitación de longitudes de onda en la combinación de todas estas juntas. Esta es una superficie tridimensional de datos: la intensidad de emisión como una función de la excitación y emisión de longitudes de onda, la cual es típicamente representada como un mapa de contorno.

JUSTIFICACIÓN:

La fluorescencia es un proceso de emisión en el cual las moléculas son excitadas por la absorción de radiación electromagnética. Las especies excitadas se relajan al estado fundamental, liberando su exceso de energía en forma de fotones. Una de las características más atractivas de los métodos de fluorescencia es su sensibilidad inherente, la cual es con frecuencia, de uno a tres órdenes de magnitud mejor que las de la Espectroscopía de absorción. No obstante, los métodos de fluorescencia se aplican mucho menos que los métodos de absorción debido al número relativamente limitado de sistemas químicos que se pueden hacer fluorescer.

OBJETIVOS:

•  Conocer el funcionamiento y operación del espectrofluorímetro.
•  Determinar la concentración de salicilato de sodio en una muestra problema mediante el uso de espectroscopia fluorescencia.

RESULTADOS Y DISCUSIONES:

Tabla de resultados de intensidad

Tabla de concentraciones  

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Utilizando la fórmula resultante de la gráfica de concentración vs intensidad; y es igual a la intensidad registrada en la muestra problema, mientras x será igual a la concentración de la misma:

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