Practica Nº 6 CULTIVO DE CELULAS

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Contenido

Practica Nº 6        2

CULTIVO DE CELULAS        3

1. [INTRODUCCIÓN]        3

2. OBJETIVOS:        4

3. MATERIAL|Y|REACTIVOS        4

4. MATERIAL|NECESARIOPARA|EL|CULTIVO DE|CELULAS,        5

5. CUESTIONARIO        14

6. BIBLIOGRAFÍA USADA POR EL ALUMNO        17

Practica Nº 6

CULTIVO DE CELULAS

1. [INTRODUCCIÓN]

Una sola célula es el elemento fundamental para la vida humana. El material genético de cada célula en el cuerpo humano - se compone de 100 billones de células - guarda el secreto de las enfermedades hereditarias, como la enfermedad de Tay Sachs, fibrosis quística, la enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades complejas como la enfermedad del corazón. El cultivo de tejidos se desarrolló por primera vez en el 1900 como un método para estudiar el comportamiento de las células - libre de las variaciones que puedan producirse en el organismo – en respuesta al estrés normal y experimental inducida. Inicialmente, los científicos utilizaron fragmentos de tejidos, pero poco a poco desarrollado técnicas para estudiar el comportamiento de las células individuales y cambió el nombre por el de cultivo de células.

El cultivo celular se refiere a la remoción de las células de un animal o planta y su posterior crecimiento en un entorno artificial favorable. Las células pueden ser eliminados del tejido directamente, desglosados por medios enzimáticos o mecánica antes del cultivo, o pueden ser derivados de una línea celular o cepa de células que ya se ha establecido.

En su forma más simple, el cultivo de células implica la dispersión de células en un entorno artificial compuesto de soluciones de nutrientes, una superficie adecuada para soportar el crecimiento de las células, y las condiciones ideales de temperatura, humedad, y la atmósfera gaseosa. En tal sistema, un investigador puede medir con precisión la respuesta de las alteraciones de las células en cultivo alteraciones, fármacos potenciales, la presencia o ausencia de otros tipos de células, agentes cancerígenos, y los virus.

Los cultivos de células y el ADN se pueden establecer a partir de sangre o pequeños fragmentos de tejido (biopsias). Los linfocitos (células blancas de la sangre) se pueden inmortalizar con el virus de Epstein-Barr virus y luego se replican indefinidamente en medio de cultivo. Los fibroblastos (células procedentes de una biopsia de la piel) se pueden utilizar para establecer una línea celular, aunque su crecimiento en medio de cultivo es limitado en el tiempo. El personal en los Coriell Cell Repositories establece cultivos de sangre y piel, y estas células se mantienen en el Instituto, listo para ser enviado a cualquier investigador interesado en el estudio de los procesos de enfermedad.

Para el cultivo de células se requiere de material plástico para el cultivo (Botellas o placas), medios de Cultivo apropiados para cada tipo de células y los suplementos como antibióticos y Antimicóticos, en el presente protocolo se resume brevemente como se desarrolla un cultivo, en este caso particularmente para células Jurkat.

1. OBJETIVOS:

• Manipular células para su cultivo
• Cultivar células de mamíferos

1. MATERIAL|Y|REACTIVOS

• Células
• Campana de flujo laminar
• Incubadora con CO2
• Placas o botellas de plástico para cultivo de células
• Filtros de esterilización (0.22um)
• Medio de Cultivo RPMI
• Microscopio
• Cámara de neubauer
• Pipetas descartables
• Centrifuga
• Baño maría
• Aspiradores
• Refrigeración

1. MATERIAL|NECESARIOPARA|EL|CULTIVO DE|CELULAS,

 rotule cada imagen:

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Medio de cultivo RPMI 1640

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Matraz de adherencia ultra baja (frasco para cultivo celular)

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Placas para cultivo celular(microplacas)

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Placas deepwell

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Placa de ELISA

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Placas para PCR

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Rack para punteras de micro pip

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Micropipeta automatica

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micropipeta multicanal

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Placas Petri C210-18

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Cámara de flujo laminar

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microscopio invertido

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INCUBADORA DE CO2

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CULTIVOS COLOCADOS EN LA INCUBADORA DE CO2

PROCEDIMIENTO.

Primer día.

1. Obtener las células en estado congelado

2. Descongelar las células con el calor de las manos

3. Colocar el contenido en una placa conteniendo 10 ml de medio

4. Incubar toda la noche a 37 C, 100% de Humedad con 5% de CO2

Segundo día

1. Mirar las células adherentes en el frasco de cultivo, a través de un microscopio con baja luz,

2. Las células deben estar formando un capa (mono capa), sobre la superficie del frasco.

3. Alimentar las células, removiendo el medio y reemplazar por medio fresco, 2 a tres veces por semana.

Sexto a Octavo día.

1. Cuando la confluencia es elevadas (superficie llena), se debe realizar los subcultivos (pase o Split).

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               Células en el primer día                                                   Células en el 6 u 8 día

SI NO HACEMOS UN TRASLADO DE LAS CELULAS A OTRO MEDIO se van a morir por lo general son células que hemos comprado

Células adherentes

1. Remover el medio del frasco de cultivo

2. Anadir 2 ml de tripsina mezclada con PBS( - fosfato salino sanguíneo ), sobre la capa de células (cubrir

las células), alternativamente la capa de células puede ser removida con espátula.

Células en suspensión

1. Remover y contar una alícuota de cultivo celular

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