Practicas microbiologia

OBTENCIÓN DE CULTIVOS PUROS:

-Utilizar recipientes y medios esteriles y protegidos de contaminación. Trabajar en un ambiente aséptico y usar instrumentos de

siempra esterilizados.

-Aislamiento: Separación de un microorganismo determinado de los otros microorganismos que pueden coexistir con el mismo en una determinada muestra.

-Cultivo: Crecimiento de las poblaciones microbianas en ambientes artificiales (medios de cultivo) en el laboratorio.

-Colonia: Población de microorganismos visible macroscópicamente desarrollada en medio sólido.

TÉCNICAS DE AISLAMIENTO EN MEDIO SÓLIDO:

-Siembra por estrías en placa: Se extiende el líquido haciendo 4 cuadrantes —> DILUCIÓN POR ARRASTRE Nos detenemos después de hacer el tercer cuadrante, flameamos el asa para esterilizarla y a continuación cogemos inóculo del cuadrante 3 y sembramos con él el cuarto cuadrante.

-Diseminación en placa: Se extiende en el líquido sobre la placa.

Se extienden 0,1-0,2ml de cultivo sobre la superficie de una placa con medio sólido utilizando una espátula estéril de extensión (espátula de Digralsky). No se pueden emplear volúmenes mayores porque el exceso de líquido no se absorbe y genera problemas al favorecer la extensión y el mezclado de distintas colonias. La placa se cultiva hasta que aparecen las colonias (solo en la superficie).

-Vertido en placa: Se vierte el líquido directamente.

Se añade y se mezcla un volumen conocido de cultivo (>0,1ml) con agar en sobrefusión (45°C ). Antes de que solidifique se vierte en una placa de Petri estéril. Este método permite emplear volúmenes de inoculo mayores, sin embargo los organismos deben resistir la temperatura del agar fundido. Aquí las colonias se crean por toda la placa; sobre y bajo la superficie.

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS:

-Aislamiento directo: se emplean medios de cultivo sólidos selectivos y/o diferenciales. Después se aíslan y se cuantifican.

-Enriquecimiento: empleando caldos selectivos se estimula el crecimiento de un tipo de microorganismo. Se incuba para que prolifere y se siembra. Solo es posible aislar las colonias, no se pueden cuantificar.

-Pretratamiento: se trata previamente la muestra antes de sembrarla. Por ejemplo con calor para el aislamiento de esporulados (resistentes, el resto muere).

CUANTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS: RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES:

El número de colonias no puede ser muy grande ni muy pequeño, para que el cálculo sea estadísticamente significativo (entre 30 y 300). Para ello se realizan previamente diluciones seriadas de la muestra.

Ejemplo: Para el análisis microbiológico de agua de mar se hacen diluciones decimales seriadas en solución salina y se siembran por triplicado en placas de agar MacConkey (volumen inoculado por placa 0,1 ml). Tras la incubación durante 24h a 37 ° C se obtuvieron los siguientes recuentos:

OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS

COLORANTES:

Son sustancias químicas orgánicas de naturaleza variable capaces de teñir las sustancias con las que son puestas en contacto. Podemos distinguir dos grupos:

-Cromóforo: grupo portador del color

-Auxocromo: comunica el color, con él se une a a estructura diana. A su vez podemos clasificar los colorantes según:

GRADO DE IONIZACIÓN:

-Ácidos: el poder colorante radica en un anión. Se unen a estructuras básicas. No tiñen la célula bacteriana pero pueden usarse como color de contrate (coloración negativa). Sí tiñen estructuras citoplasmáticas de células eucariotas.

Ejemplo: fucsina ácida, naranja G, eosina, azul de anilina...

-Básicos: el poder colorante radica en un catión. Se unen a estructuras ácidas. Tiñen la célula bacteriana uniformemente (ácidos nucleicos y polisacáridos

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