Procesos Celulares
chirinoy12317 de Enero de 2015
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Introduccion……………………………………………………………2
Primera sesión
Preparacion de las muestras y cultivo en un medio selectivo
Objetivo…………………………………………………………………
Procedimiento…………………………………………………………
Observaciones………………………………………………………….
Segunda Sesión
Aislamiento y observación de las características macroscópicas y microscópicas de las enterobacterias
Objetivo………………………………………………………………….
Procedimiento…………………………………………………………
Observaciones y resultados……………………………………….
Tercera sesión
Pruebas bioquímicas para enterobacterias
Objetivo………………………………………………………………..
Procedimiento………………………………………………………..
Observaciones y resultados……………………………………..
Cuarta sesión
Identificacion de las enterobacterias
Objetivo…………………………………………………………………
Procedimiento………………………………………………………..
Observaciones y resultados………………………………………
Cuestionario………………………………………………………….
INTRODUCCION
Considerando que el estudio de la enfermedades transmisibles ocasionadas por microorganismos patógenos constituye el objeto de transformación del modulo “Procesos Celulares Fundamentales” del Tronco Divisional del área Ciencias Biológicas y de la Salud, el objetivo del presente texto es introducir a los alumnos de este modulo en el manejo de los métodos básicos empleados en el laboratorio de microbiología, tomando como modelo el aislamiento e identificación de enterobacterias a partir de muestras del agua.
La metodología descrita consta de cuatro sesiones:
1. Preparación de las muestras y cultivo en un medio selectivo.
2. Aislamiento y observación de las características macroscópicas y microscópicas de las enterobacterias.
3. Pruebas bioquímicas para enterobacterias.
4. Identificación de las enterobacterias.
Las enterobacteriaceae son bacilos gramnegativos, distribuidos en la naturaleza en una forma amplia. Se encuentran en el suelo, en el agua, sobre las plantas y como su nombre lo indica se encuentran dentro del tracto intestinal de los seres humanos y de los animales, y se aíslan con mucha frecuencia de muestras clínicas.
Las enterobacterias son causantes de un gran número de enfermedades infecciosas en el humano, entre las más comunes se encuentran los síndromes diarreicos y disentéricos, causados por cepas de Escherichia Coli, Salmonella y Shigella.
La familia enterobacteriaceae está formada por aproximadamente 31 géneros y 139 especies y miles de serotipos. Algunos miembros de la familia siempre se asocian a enfermedades cuando se aíslan en el hombre, por ejemplo: Shigella, Salmonella, Yersinia Pestis. Mientras que otros son miembros de la flora normal que producen infecciones oportunistas, por ejemplo: Escherichia Coli, Klebsiella Pneumoniae, Proteus Mirabilis.
Las enterobacterias son causantes de un gran número de enfermedades infecciosas en el humano, entre las más comunes se encuentran los síndromes diarreicos y disentéricos, causados por cepas de Escherichia Coli, Salmonella y Shigella.
La familia enterobacteriaceae está formada por aproximadamente 31 géneros y 139 especies y miles de serotipos. Algunos miembros de la familia siempre se asocian a enfermedades cuando se aíslan en el hombre, por ejemplo: Shigella, Salmonella, Yersinia Pestis. Mientras que otros son miembros de la flora normal que producen infecciones oportunistas, por ejemplo: Escherichia Coli, Klebsiella Pneumoniae, Proteus Mirabilis.
PRIMERA SESION
PREPARACION DE LAS MUESTRAS Y CULTIVO EN UN MEDIO SELECTIVO
Objetivo
El alumno aprenderá a preparar la muestra y a sembrarla por estría cruzada para obtener colonias aisladas.
Procedimiento
1. Preparación de la zona estéril para el trabajo microbiológico.
1a) Lava con agua y jabón la superficie de la mesa de laboratorio, déjala secar y desinféctala con la solución de hipoclorito de sodio al 10% que preparaste o con el benzal diluido 1:10. Coloca el mechero sobre la mesa y enciéndelo, dejar que seque la mesa.
2. Preparación de una dilución 1:10 del agua.
2a) Etiqueta el tubo de 16 x 150 ml estéril con tapón del algodón.
2b) Agita vigorosamente por inversión al frasco con la muestra.
2c) Con una pipeta de 10 ml estéril adiciona al tuno 9 ml de SSI estéril.
2d) Con una pipeta de 1 ml estéril mide 1 ml de tu muestra y viértela en el tubo, para obtener la dilución 1:10.
2e) Cierra el tubo y agítalo unas 5 veces procurando que el tapón no se moje.
3. Siembra del agua y sus diluciones en el medio Mac Conkey
3a) Utiliza un hisopo estéril o en su defecto el asa bacteriológica esterilizada para cada una de las siembras.
3b) Utiliza dos cajas de agar Mac Conkey para cada muestra. Una para la muestra sin diluir y otra para la dilución 1:10.
3c) Antes de realizar la siembra etiqueta perfectamente la caja de Petri con un marcador de tinta indeleble en la parte de debajo de la caja.
4. Sembrado
4a) Humedece solamente la punta del algodón de un hisopo estéril con la muestra y descarga su contenido en forma circular cerca de un borde de una caja de agar Mac Conkey estéril. Ver figura 1a.
4b) Esteriliza el asa bacteriológica calentándola al rojo vivo en la flama del mechero, para enfriar, sumerge dicha asa en el borde del agar durante unos segundos y una vez fría procede a estriar el inoculo en el primer cuadrante de la caja Petri.
4c) Esteriliza nuevamente el asa como se indico en el párrafo anterior, dejar enfriar y estría el segundo cuadrante de la caja empezando en uno de los extremos de la estría del primer cuadrante.
4d) Flamea el asa otra vez, deja enfriar y estría el tercer cuadrante, comenzando en el extremo de la estría del segundo cuadrante, donde no haya cruce con el estriado inicial.
4e) Flamea el asa de nuevo, deja enfriar y estría el último cuadrante, comenzando en el extremo de la estría del tercer cuadrante donde no haya cruce con el segundo estriado.
4f) Por último, forma una estría abierta en el centro de la caja y después esteriliza el asa.
4g) Coloca la tapa y fíjala a la base de la caja con dos pedacitos de masking-tape colocados en los extremos opuestos.
4h) Recuerda que las muestras van sembradas por duplicado.
4i) Revisa que pusiste la etiqueta a las cajas señalando el grupo, turno, No. de equipo, y fecha.
4j) Guarda las cajas de Agar Mac Conkey con la tapa hacia abajo en la estufa y déjalas incubar a 37° C durante 24 horas.
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Observaciones
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SEGUNDA SESION
AISLAMIENTO Y OBSERVACION DE LAS CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS Y MICROSCOPICAS DE LAS ENTEROBACTERIAS
Objetivo
El alumno aprenderá a observar y a determinar las características macroscópicas y microscópicas de las colonias aisladas; Así como obtener cultivos puros.
Procedimiento
1. Selección de las colonias desarrolladas en agar Mac Conkey
1a) Realiza las Observaciones macroscópicas de la morfología de las colonias seleccionadas del agar Mac Conkey y anotar los resultados.
2. Procedimiento
2a) Abre las cajas de agar Mac Conkey donde sembraste el agua y su dilución y selecciona seis colonias aisladas que presenten las siguientes características (dos de cada tipo): a) Colonias rojas, b) Colonias levemente rosadas, c) Colonias blancas.
3. Resiembra de las colonias desarrolladas en el agar Mac Conkey.
3a) Divide cada caja para resiembra de agar Mac Conkey en tres secciones (marca la base de la caja por fuera con un plumón). Rotula cada sección con el número de la colonia correspondiente.
Dentro de la zona estéril para trabajo microbiológico:
3b) Calienta el asa al rojo vivo en la flama del mechero y para enfriarla sumérgela en el medio de cultivo cercano al borde de la caja de Petri. Con el asa estéril y fría colecta la colonia aislada desarrollada en la caja de Agar Mac Conkey del cultivo primario y deposítala en la sección que le corresponde cerca del borde de la caja de agar Mac Conkey en donde se llevara acabo la resiembra.
3c) Una vez depositada la colonia en el medio de cultivo, inicia el arrastre del inóculo con el asa estéril y fría aplicando una estría muy cerrada y conforme vayas finalizando el arrastre de las bacterias, abre paulatinamente la estría hasta finalizar este totalmente abierta.
4c) Concluido lo anterior cubre y fija la tapa de la caja con dos tiras de masking-tape colocados en extremos
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