Proteinas laboratorio
Enviado por Xiomara Jorga • 11 de Agosto de 2015 • Informes • 777 Palabras (4 Páginas) • 144 Visitas
Practica #3:
“CUANTIFICACION DE PROTEINAS: METODO DE BRADFORD”
Por:
ANA LUCIA OSPINA RUIZ
YONADIS LUNA PEREZ
CRISTIAN CAMILO HINCAPIE
Profesor:
ARLEY CAMILO PATIÑO
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
Viernes 7- 10 am
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA
MEDELLIN
2015
MARCO TÉORICO.
Método de determinación de proteína que implica el enlace de azul brillante de Coomassie G-250 a proteína. El enlace de la tintura de proteína causa un cambio en el máximo de absorción del colorante de 465 a 595 nm, y es el aumento de la absorción a 595 nm que se supervisan. Este ensayo es muy reproducible y rápido con la fijación del colorante prácticamente completa en aproximadamente 2 minutos con una buena estabilidad de color de 1 hora. Hay poca o ninguna interferencia de cationes como el sodio o el potasio ni de carbohidratos como la sacarosa Los únicos componentes que se encuentran para dar excesiva interferencia color en el ensayo son relativamente grandes cantidades de detergentes como dodecil sulfato de sodio, Triton X-100, vidrio y detergentes comerciales. Interferencia de pequeñas cantidades de detergentes pueden ser eliminadas por el uso de controles adecuados.
OBJETIVO.
- Determinar la concentración de la muestra problema a partir de la curva de calibración de albumina, usando el método de Bradford.
RESULTADOS.
CONCENTRACION | ABSORBANCIA |
1 | 0,973 |
0,5 | 0,861 |
0,25 | 0,507 |
0,125 | 0,336 |
0,0625 | 0,21 |
0,0312 | 0,13 |
0,0156 | 0,047 |
[pic 1]
Determinación por interpolación de la muestra problema.
Aplicando la ecuación de la recta:
y = 0,9362x + 0,1723
Siendo “y” la absorbancia y “x” la concentración.
Despejando concentración:
[pic 2]
Luego, reemplazamos “y” por la absorción de la muestra problema que fue de 0.740, dando la siguiente concentración:
x = 0.606
ANALISIS DE RESULTADOS.
El método que usamos nos permitió medir la unión del azul de comassie a las proteínas, para tomar los datos y realizar nuestra curva de calibración, que posteriormente usamos como patrón para medir la concentración de la muestra problema al momento de realizar las diluciones debimos repetir algunas pues no estaban dentro de los valores que se esperaban, esto puede ser debido a un manejo incorrecto de la micro pipeta, sustancias en los tubos o no agitar bien.
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