Proteinas laboratorio

Practica #3:

“CUANTIFICACION DE PROTEINAS: METODO DE BRADFORD”

Por:

ANA LUCIA OSPINA RUIZ

YONADIS LUNA PEREZ

CRISTIAN CAMILO HINCAPIE

Profesor:

ARLEY CAMILO PATIÑO

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Viernes 7- 10 am

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA

MEDELLIN

2015

MARCO TÉORICO.

Método de determinación de proteína que implica el enlace de azul brillante de Coomassie G-250 a proteína. El enlace de la tintura de proteína causa un cambio en el máximo de absorción del colorante de 465 a 595 nm, y es el aumento de la absorción a 595 nm que se supervisan. Este ensayo es muy reproducible y rápido con la fijación del colorante prácticamente completa en aproximadamente 2 minutos con una buena estabilidad de color de 1 hora. Hay poca o ninguna interferencia de cationes como el sodio o el potasio ni de carbohidratos como la sacarosa Los únicos componentes que se encuentran para dar excesiva interferencia color en el ensayo son relativamente grandes cantidades de detergentes como dodecil sulfato de sodio, Triton X-100, vidrio y detergentes comerciales. Interferencia de pequeñas cantidades de detergentes pueden ser eliminadas por el uso de controles adecuados.

OBJETIVO.

• Determinar la concentración de la muestra problema a partir de la curva de calibración de albumina, usando el método de Bradford.

RESULTADOS.

[pic 1]

Determinación por interpolación de la muestra problema.

Aplicando la ecuación de la recta:

y = 0,9362x + 0,1723

Siendo “y” la absorbancia y “x” la concentración.

 Despejando concentración:

[pic 2]

Luego, reemplazamos “y” por la absorción de la muestra problema que fue de 0.740, dando la siguiente concentración:

x = 0.606

ANALISIS DE RESULTADOS.

El método que usamos nos permitió medir la unión del azul de comassie a las proteínas, para tomar los datos y realizar nuestra curva de calibración, que posteriormente usamos como patrón para medir la concentración de la muestra problema al momento de realizar las diluciones debimos repetir algunas pues no estaban dentro de los valores que se esperaban, esto puede ser debido a un manejo incorrecto de la micro pipeta, sustancias en los tubos o no agitar bien.

CONCLUSIONES.

• De acuerdo a lo observado en el laboratorio acerca del método de bradford cuando el azul de comassie interactúa con las proteínas, este cambia su absorbancia máxima, permitiéndonos cuantificar la concentración de proteínas en solución.
• Hay muchos métodos de cuantificación, y una de las ventajas de Bradford es la unión estable durante una hora y lo rápido que se forma el complejo proteína-colorante.
• Hay que tener mucho cuidado a la hora de manipular las soluciones ya que al momento de analizar en el espectrofotómetro se pueden ver afectados los datos.

PREGUNTAS DEL MANUAL.

• ¿Cuál es la base del Método de BradFord?

El Método de Bradford se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 g), simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación.  

• ¿Cuáles son las interferencias del método?

En este método interfieren los detergentes y las soluciones básicas.

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