Informe De Laboratorio De Proteinas

CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS

Los prótidos comprenden: los aminoácidos, los polipéptidos y las proteínas. Las proteínas son identificadas x intermedio d reacciones de coagulación (desnaturación), de precipitación y de coloración.

1. ANÁLISIS ELEMENTAL DE PROTEÍNA:

1.1. Presencia de carbono, hidrógeno, oxígeno

Se coloca 0.2g de albúmina de huevo en polvo en un tubo limpio y seco, se calienta gradualmente hasta carbonizar la muestra. La carbonización indica la presencia de carbono, y el depósito de agua en la parte superior del tubo indica la presencia de oxígeno e hidrógeno.

1.2. Presencia de Azufre.

Se calienta 0.2g d albúmina d huevo seca con 1g d sosa-cal (mezcla fundent) n un tubo d ensayo. Se deja enfriar el tubo, luego se añade 5mL d HCl 6N al residuo. Se coloca un papel filtro impregnado d acetato d plomo 0.1M sobre la boca del tubo. Si hay aparición d una mancha café obscura d PbS formado, se determina la presencia d azufre.

1.3. Presencia de Nitrógeno.

Se coloca 0.2g d albúmina en polvo en un tubo d ensayo y se añade 2mL NaOH 6N, calentar cuidadosamente. Note el olor de amoniaco y el efecto de sus vapores sobre el papel tornasol rojo.

2. SOLUBILIDAD DE LAS PROTEÍNAS

Se rotulan 4 tubos d ensayo y se colocan n cada tubo 1mL de sln d albúmina al 1%; se añade n orden respectivo 2mL d: NaOH al 10%, Na2CO3 al 0.5%, HCl al 0.2% y agua. Observe y anote. La mayor o menor solubilidad de las muestras se señalan con: (-) insoluble; () parcialmente insoluble y (+) soluble.

Tubo Nº ALBÚMINA 1% SOLUCIONES RESULTADOS

1 1 Ml NaOH 10% (2 mL)

2 1 mL Na2CO3 0,5% (2 mL)

3 1 Ml HCl 0,2% (2 mL)

4 1 Ml Agua (2 mL)

(-) Insoluble; (+/-) parcialmente insoluble; (+) soluble.

3. REACCIONES DE COAGULACIÓN (DESNATURACIÓN)

Los agentes desnaturantes (ácidos fuertes, alcalis, calor, etc), destruyen la estructura terciaria de las proteínas, tornándolas irreversiblemente insolubles.

3.1. Desnaturación con ácidos minerales fuertes

Se coloca en un tubo de ensayo, cerca de 2mL de ácido nítrico concentrado y añadir lentamente y con cuidado x las paredes, 2mL d la solución de proteína, sin mezclar. En la interfase aparece un anillo blanco. Ésta es la reacción de Heller.

4. TERMOCOAGULACIÓN

Se añade a un tubo de ensayo conteniendo 5mL de sln proteica, 3 gotas de sln de ácido sulfúrico 1N y se calienta a ebullición. Se adiciona al líquido todavía caliente, gota a gota, y agitando, hidróxido de sodio al 1%. En un momento dado se dará la coagulación de las proteínas. Se continúa la adición de la sln de hidróxido d sodio, gota a gota y agitando hasta disolución completa del precipitado. Se calienta nuevamente hasta ebullición, no habrá coagulación. Se añade al líquido todavía caliente, gota a gota y agitando, ác acético al 1,5%. En un momento dado aparecen coágulos d proteína

Explicación:

La termocoagulación d las proteínas es tanto más rápida e intensa, cuanto más próximos estuviesen d su punto isoeléctrico. Para la mayoría d las proteínas animales el punto isoeléctrico es aproximadamente 5. Cuando el pH del medio está muy alejado del punto isoeléctrico, no habrá coagulación.

5. REACCIONES DE PRECIPITACIÓN:

Estas rxs son manifestaciones del estado coloidal o del carácter anfótero d las proteínas. Las proteínas, en el lado ácido del punto isoeléctrico (pHi) se comportan como cationes (proteínas  ), y, en el lado alcalino, como aniones (proteína ).

PROTEÍNAS (+) PROTEÍNAS ()

pH 1 5 7 - 14

Precipitación con

reactivos para alcaloides pHi Precipitación con sales de metales pesados.

La precipitación, a diferencia de la coagulación, es un fenómeno reversible, permitiendo la recuperación perfecta de las proteínas. Puede ser efectuada por la adición de sales de metales pesados, con reactivos para alcaloides o de electrolitos fuertes.

5.1. Precipitación con sales de metales pesados:

En 2 tubos de ensayo numerados, colocar en cada uno de ellos, 3mL de la sln proteica. Al primero adicionar 3mL de agua destilada y 5 gotas de cloruro mercúrico al 5%, se forma un precipitado blanco, soluble en ácidos (comprobar añadiendo gotas de H2SO4 1N). Al segundo tubo adicionar igual volumen de sln d cloruro d sodio al 20%, y enseguida, 5 gotas de sln d cloruro mercúrico. No habrá precipitación.

Explicación:

Las sales de metales pesados actúan como un catión, originándose verdaderos proteinatos, insolubles, como en el primer tubo. En el segundo tubo no hubo precipitación por q la disociación de la sal mercúrica (electrolito muy débil), naturalmente no muy intensa se torna todavía menor en presencia de cloruro de sodio, sal muy disociable y de anión común.

HgCl2 2Cl  + Hg

NaCl Cl  + Na

En esta reacción de precipitación la proteína funciona negativamente, lo que solo es posible en el lado alcalino de su punto isoeléctrico. En medio ácido no se da la precipitación.

5.2. Precipitación con los reactivos para alcaloides:

Reacción de Esbach:

Se coloca en un tubo d ensayo 2mL de solución de proteína y 10 gotas de reactivo de Esbach. Se forma un precipitado amarillo, soluble en alcalis (comprobar añadiendo gotas de hidróxido de sodio al 10%).

Explicación:

Los reactivos para alcaloides (ácido pícrico, ácido sulfosalicílico, ácido tánico, ácido túngstico) son ácidos y actúan por su anión. En este caso, los precipitados son verdaderamente sales de las proteínas, los cuales, entonces, funcionan positivamente, lo que solo es posible en el lado ácido del punto isoeléctrico. En el lado alcalino las proteínas funcionan negativamente, lo que no permite la precipitación.

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