RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES

I. TÍTULO:

“RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES”

II. INTRODUCCION

En el presente informe trataremos sobre la estimación por el método del Número Más Probable (NMP), este método es aplicable para estimar el número de microorganismos en muestras de suelo, agua y alimentos tanto para bacterias aerobias como anaerobias.

Existen diversos métodos para cuantificar el número de microorganismos presentes en muestras líquidas y sólidas. Dentro de las técnicas más comunes se encuentra el recuento directo por microscopia de fluorescencia, así como los procedimientos basados en diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintéticos sólidos o líquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) o la estimación por el método del Número Más Probable (NMP).

Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces están formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminación fecal. Éstos últimos se denominan termo tolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas en los alimentos. Esta es la característica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales.

Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades.

III. MATERIALES

3.1. Materiales biológicos

 Jugo de piña

3.2. Materiales de vidrio

12 tubos

Varilla de agitación

2 matraces de 100 y de 50ml

Pipeta de 10 y 1ml

Campanitas

Mechero

Luna de reloj

Probeta

3.3. Reactivos

Caldo brila

3.4. Otros

 Algodón

 Alcohol

 Agua destilada

 Trípode

 Gradilla

IV. METODOS

4.1. Método del número más probable (nmp)

La determinación del nmp de bacterias coliformes en una muestra se hace a partir de la técnica de los tubos múltiples, en la cual volúmenes decrecientes de la muestra (diluciones decimales consecutivas) son inoculadas en un medio de cultivo adecuado la combinación de los resultados positivos y negativos es usada en la determinación del nmp.

4.2. Esterilización del materiales

o Esterilizamos pipetas de 10 ml y 1ml.

4.3. Preparación del caldo brila

4.3.1. CALDO BRILA CON MAYOR CONCENTRACION

Para 40 ml de agua destilada colocamos 3,2g de agar verde brila en un matraz de 50ml.

4.3.2. CALDO BRILA NORMAL

Para 80 ml de agua destilada colocamos 6,4g de agar verde brila en un matraz de 100ml.

 Llevamos a calentar en un mechero con ayuda de un trípode.

 Para asegurar la completa disolución del agar, el medio se calienta hasta ebullición hasta que el líquido se ponga verde transparente (translúcido) al mismo tiempo que se somete a agitación previamente a su esterilización en la autoclave.

4.4. Método para la observación y presencia de turbidez y gas

o En una gradilla ubicamos los 12 tubos de ensayo y rotulamos 4 tubos a doble concentración de caldo brila y los 8 restantes a concentración normal.

o Ubicamos una campanita de vidrio a cada tubo de ensayo cuidadosamente.

o Luego se agregó 10ml. de doble concentración

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