REPORTE DE PRÁCTICA No 6 REGULACIÓN (β-GALACTOSIDASA EN E.coli)

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA MICROBIANA

SEMESTRE FEBRERO-JULIO 2019

REPORTE DE PRÁCTICA No 6

REGULACIÓN (β-GALACTOSIDASA EN E.coli)

GRUPO: 5IM1     SECIÓN:2   FECHA: 21/05/2019

NOMBRES

• Bautista Ventura Miriam Mireya
• Morales García José Antonio
• Pérez Evangelista Jorge Alberto

HIPÓTESIS

Se sabe que E. coli es capaz de utilizar lactosa como fuente de carbono y energía, su enzima β-galactosidasa responsable del metabolismo, se sintetiza más rápido en presencia de lactosa y con una concentración pequeña de glucosa (1). Mientras que en presencia de glucosa E.coli utiliza ésta como fuente de carbono, y a su vez la glucosa reprime la síntesis de la β-galactosidasa.

Si se le adiciona lactosa al medio se observará un efecto inductor en la síntesis de β-galactosidasa, presentando una pendiente positiva en la gráfica de la cinética enzimática, entonces cuando se agrega glucosa se esperará un efecto represor en la síntesis, presentando una pendiente negativa en dicha gráfica.

OBJETIVO GENERAL

Entender el funcionamiento del operón de la lactosa en

presencia y ausencia de este carbohidrato.

Entender el funcionamiento del operón de la lactosa en

presencia y ausencia de este carbohidrato.

Entender el funcionamiento del operón de la lactosa en

presencia y ausencia de este carbohidrato.

Entender el funcionamiento del operón de la lactosa y control de la síntesis de la β-galactosidasa en E.coli al cambiar la fuente de carbono.

OBJETIVOS PARTICULARES.

• Realizar la gráfica usando los datos de cambio de absorbancia en función del tiempo y observar la actividad de β-galactosidasa en E.coli
• Mediante una gráfica observar la velocidad de síntesis de la enzima β-galactosidasa del operón Lac en E.coli al usar glucosa y lactosa como fuente de carbono.
• Con base a los resultados demostrar el papel inductor de la lactosa en la síntesis de β-galactosidasa en E.coli.
• Con base a los resultados demostrar el papel represor de la glucosa en la síntesis de β-galactosidasa en E.coli.

DISCUSIÓN

En la grafica de la actividad de β-galactosidasa en E.coli  se observa un comportamiento distinto para cada medio ya que se hizo crecer en 2 medios diferentes, uno con lactosa y otro con glicerol. Se observó que el cultivo crecido en lactosa presentó una alta actividad de la enzima β- galactosidasa, mientras que el medio crecido en glicerol también presento una pequeña cantidad de la enzima que se encuentra en estado basal.

Con lo dicho anteriormente comprobamos quela enzima β-galactosidasa que es sintetizada por el operon lactosa es inducible cuando en el medio de crecimiento se encuentra presente la lactosa, y en caso de no estar presente solo se sintetizara la enzima β-galactosidasa en su estado basal.

En la gráfica de la velocidad de inducción y represión catabólica de la enzima β-galactosidasa en E.coli se observa un incremento en un rango de tiempo de 0 a 30 min, esto se debió a que la β-galactosidasa estaba siento inducida, ya que en el tiempo 0 fue añadida lactosa como fuente de carbono y un poco de ésta se convierte en alolactosa uniéndose a los sitios específicos de la proteína represora que codifica al gen LacI causando el cambio conformacional de ésta, permitiendo la síntesis de la β-galactosidasa (2).

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