Reporte de práctica No. 06: CROMATOGRAFIA

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Segundo semestre de la licenciatura: Químico Bacteriólogo Parasitólogo.

Unidad de aprendizaje:

Química orgánica

Reporte de práctica No. 06: CROMATOGRAFIA.

Por:

Equipo No. 06.

• Franco Mosqueda Ilse Rosario.
• García Pérez Angel Eduardo.

Grupo: 2QV1

Fecha de realización de la práctica: 5 de marzo de 2019.

Fecha de entrega del reporte: 12  de marzo de 2019.

OBJETIVO GENERAL.

Efectuar los dos sistemas cromatográficos (en placa fina y en columna); para Identificar los compuestos que se lograron separar de las diferentes muestras.

OBJETIVOS PARTICULARES.

• Realizar una comparación entre ambos tipos de sistemas y concluir en base a ello.
• Determinar los diferentes parámetros que conllevan las dos técnicas efectuadas.

RESULTADOS.

1. CROMATOGRAFIA EN PLACA FINA

SEPARACIÓN  DE CAROTENOS

Se colocó la muestra de  carotenos sobre la línea marcada previamente en la placa de sílice gel, fue depositada en la cámara cromatografica para que  la fase móvil (hexano-acetona 6:1) actuara y después por capilaridad empezara a arrastrar los diferentes componentes de  nuestra muestra, logrando así su separación en base a la polaridad de cada componente. Se calcularon los valores de :[pic 3]

(Distancia recorrida por el eluyente: 3.4cm)

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1. SEPARACIÓN DE CAROTENOS POR CROMATOGRAFIA EN COLUMNA.

• Empaque de  la  columna con sílice gel y mezcla de hexano: acetona 1:1
• Colocación de cloruro de sodio, una capa de aproximadamente 1 cm.

• Colocación de  concentrado de espinacas

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• Recolección de primera fracción colorida en tubos de ensaye

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• Cambio del eluyente a etilo-metanol 1:1 y recolección de segunda  de siguiente fracción

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• Realización de cromatografía en placa fina de las fracciones recolectadas.[pic 12]

• Calculo de  :[pic 13]

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SEPARACIÓN  DE LICOPENOS.

Se realizó separación  del extracto de jitomate por placa fina y su fue:[pic 16]

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ANALISIS.

De acuerdo a los resultados obtenidos en la experiencia de separación de  carotenos por cromatografía en placa fina podemos observar que de  sus componentes  los menos  polares  son  los carotenos ya que  fueron los que  lograron subir más  en la  placa de sílice gel. El compuesto de sílice gel  actuó como un adsorbente que por su capacidad  de formar puentes de hidrogeno, logro que las xantofilas, por su polaridad y estructura,  no  recorrieran casi nada  de distancia en la cromatoplaca, contrario a lo que sucedió con los carotenos.

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*Podemos observar que  en ningún tipo de carotenos es factible  que se puedan formar puentes de hidrogeno debido a que  no contiene ningún OH en su  estructura

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*Por otro lado  la estructura de la xantofila  cuenta con grupos OH  que ayudan a que se formen puentes de hidrogeno  con la sílice gel  y de este modo a adsorción ocurra de inmediato

En el caso de la separación del extracto  de jitomate, o sea los licopenos,  se pudo observar que  en realidad  hubo un gran recorrido en la placa debido a que los licopenos son muy poco polares.

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 Al observar los valores obtenidos de  cabe resaltar que si son más altos  es porque son menos  polares y si son bajos es porque son más polares[pic 21]

En la cromatografía en columna el mecanismo de separación  permite obtener  primero aquellos componentes que son  menos polares   ya que los más polares quedaran  en la parte superior de la columna.

Conclusiones.

• Los resultados de la cromatografía fueron los esperados; en ambas técnicas logramos identificar los componentes de interés.
• En la cromatografía por columna se debe tener un buen manejo, principalmente en no dejar secar la fase móvil para evitar alteraciones en la realización de la misma.
• Dada la teoría y el fundamento de la polaridad de los componentes, efectivamente logramos comprobarlo. En cromatografía por placa fina, los componentes que quedaron adheridos lo más cerca de la parte inferior de la placa fueron las clorofilas alfa, mientras que los que quedaron adheridos en la parte superior fueron los carotenos; muy polares y poco polares, respectivamente.
• La técnica por cromatografía en columna es de baja velocidad, mientras que en la cromatografía por placa fina es un procedimiento muy rápido.

Cuestionario.

1. Indicar qué precauciones se deben de tener al empacar una columna de cromatografía.

• Se debe de manejar con cuidado.
• No se debe dejar secar la fase sólida, dado que se puede quebrantar.
• El algodón no debe de presionar tanto la salida a la llave.
• Procurar que el sistema esté equilibrado, no haya desperfectos en las alturas, manteniendo la horizontal.

1. Indicar qué fracciones se separaron por cromatografía en columna, de los extractos de espinaca, jitomate y cómo se identificaron.

• Espinaca: se separaron carotenos, xantofilas, clorofilas alfa y beta. Se lograron identificar por sus colores en la columna y en los recuperados. Los carotenos son de un color naranja, las xantofilas amarilla, clorofila alfa color verde claro y las clorofilas beta color verde oscuro.
• Mientras que en el jitomate se identificaron los licopenos, revelados por el permanganato de potasio (KMnO4) el cual es un agente oxidante.

1. Escriba ¿qué conclusiones se obtienen de la cromatografía en capa fina y de la cromatografía en columna?

Cromatografía en capa fina: es un método rápido para la identificación de compuestos de una mezcla, fácil de realizar y no es muy factible para realizar procesos cuantitativos.

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