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Resumen Control 4 Microbiologia


Enviado por   •  7 de Mayo de 2016  •  Apuntes  •  947 Palabras (4 Páginas)  •  184 Visitas

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Control 4 – “Recuento Bacteriano y Análisis de Agua”

CRECIMIENTO BACTERIANO

  • Crecimiento: Incremento ordenado de componentes de un organismo. Multiplicación celular es consecuencia del crecimiento.
  • Se mide en concentración celular (número de células por volumen) o densidad celular (peso seco por volumen).
  • Sea dB/dt = a*B con B masa bacteriana y a la tasa constante de crecimiento instantáneo.
    Por lo tanto: ln(Bt) = ln(B0) + a*t
  • tD: Tiempo medio de generación  1/tD = u = 1,45*a
  • u: Tasa constante de crecimiento exponencial [generaciones/h]

RECUENTO DE MICROORGANISMOS

  • Procedimiento para conocer el número de microorganismos en una muestra.
  • Recuento de totales: Microorganismos vivos y muertos. Viables: Solo vivos.
  • Recuento directo: Microscopio. Indirecto: Por crecimiento o propiedad.
  • Recuento de totales:
  • Recuento de Breed:
  • Usado para recuento de MO en la leche.
  • Sobre portaobjeto, se dibuja un cuadrado. Homogenizar muestra y con pipeta Pasteur colocar una gota de muestra sobre el cuadrado y extenderla. Secar y fijar al calor.
  • Cubrir con cristal violeta por 1 minuto. Lavar y secar.
  • Observar al microscopio con aceite de inmersión.
  • N° Células/mL = X de célula por campo*3000*100.
  • 3000: Área del campo del microscopio. 100: Inverso del inoculo.
  • Recuento con cámara de Petroff-Hauser o Hermocitómetro:
  • Colocar gota de cultivo en un portaobjetos Hemocitómetro (originalmente ideado para glóbulos rojos).
  • Excavación posee 25 cuadrados y cada uno 16 cuadrados más pequeños.
  • Contar células presentes en varios cuadrados grandes y sacar promedio. Multiplicarlo por 25 (para mm2). Multiplicarlo por 50 (para mm3). Multiplicarlo por 1000 (para cm3).
  • N° Células/mL = X*25*5’*1000.
  • Recuento con sales de tetrasolium:
  • Dichas sales se agregan, se reduce por metabolismo y se tiñe rojo. Células muertas quedan sin teñir.
  • Recuento por microscopia de fluorescencia:
  • Bacterias se tiñen con naranja de acridina, capaz de integrarse al ADN (quedan células fluorescentes). Directo y viable/totales.
  • Recuento de células viables:
  • Método de la placa extendida:
  • Muestra de 0,1 [mL] se extiende asépticamente.
  • Incubación hasta que colonias sean visibles.
  • Numero de colonias  Número de células.
  • Método de placa vertida:
  • Muestra mezclada con agar a 45-50 [°C], colocándose sobre una placa Petri estéril.
  • Formación de colonias, por lo que es sensible. Recuento de lodos o suspensiones en alimentos.
  • Desventaja: MO dañados por breve calentamiento.
  • Permite identificación positiva. Cada colonia se origina de una celula. Si es mezcla, no se pueden diferencias entre colonias.
  • Debe haber al menos 300 colonias por placa.
  • Método de las diluciones y plaqueo:
  • Se toma 0,1 [mL] y se diluye en 9 [mL] de solución salina al 0,8% de cloruro de sodio. Así sucesivamente hasta llegar a dilución 10^-10.
  • Cada dilución con una pipeta nueva.
  • De las últimas tres se toma 0,1 [mL] y se siembra en superficie en placa Petri con agar nutritivo. Con asa Drigalsky se homogeniza.
  • Incubar placa a temperatura adecuada por 24 – 48 horas.
  • Contar número de colonias. Solo tomar en cuenta las placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Sacar promedio.
  • N° Células/mL = X colonias*1/Dilución*1/Inoculo.
  • Método turbidímetro:
  • A medida que crece población celular, el medio presenta turbidez.
  • Se mide por un espectrofotómetro.
  • En un tubo especial se coloca medio de cultivo. Se interpone entre un foco luminoso y una unidad fotoeléctrica, acoplada con galvanómetro o disco de lectura, registrando el porcentaje de luz transmitida.
  • Porcentaje de luz se relaciona inversamente con la turbidez.
  • Rápido y sencillo. Confección de curvas de crecimiento.
  • Número más probable de microorganismos:
  • Se diluye hasta que densidad celular sea menor a 1 célula por mL.
  • Se toma cantidad pequeña de muestra por duplicado y cada una es inoculada en un tubo, donde posteriormente se incuba. Usado para trabajar con series de 3, 5 o 10 tubos por cada dilución. Mayor cantidad de tubos indica mayor precisión.
  • Utilización de tablas de probabilidades.
  • Ver que tubos presentan turbidez y se asignan números.
  • Para MO difíciles de cultivar en medios sólidos. También se utilizan en medios líquidos.
  • Recuento de filtro de membrana:
  • Para determinación de coliformes. Algunas muestras difíciles de analizar por turbiedad del medio.
  • Pasar con ayuda de vacío la muestra de agua a través de una membrana celulosa de 0,45 micrones. En aguas contaminadas se debe diluir previamente la muestra.
  • Número ideal de colonias en el filtro entre 20 y 60.
  • Filtro colocado en placa Petri con un medio agar adecuado:
  • M-FC para coliformes fecales a 45 [°C] por 24 horas.
  • M-Endo para coliformes totales a 37 [°C] por 24 horas.
  • Tiempo de filtración hasta incubación sin exceder los 30 minutos.
  • Ventajas: Resultados rápidos, volúmenes mayores de muestra, resultados más precisos y equipos no ocupan un mayor espacio.
  • Limitaciones: En muestras con gran cantidad de sólidos, el crecimiento se constituye en una película, imposibilitando el recuento.

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