Separación De Lipidos

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Pruebas de solubilidad:

La glicerina es un lípido simple higroscópico que está formado por una molécula de propanotriol al que se unen por enlaces lipídicos tres moléculas de ácidos grasos. Este alcohol de bajo peso molecular y con más de un grupo de ( -OH) es muy soluble en agua y en etanol, puesto que el grupo hidroxilo confiere polaridad a la molécula y posibilidad de formar puentes de hidrógeno con dichos disolventes. Al realizar la prueba con acetona, se observó que al inicio muestra una solubilidad casi absoluta, pero al cabo de un tiempo, la glicerina se precipitó debido a que tiene una mayor densidad con respecto a la del disolvente empleado. Por el contrario, este lípido fue insoluble en benceno y cloroformo ya que son disolventes no polares. Esta apolaridad impide las interacciones intermoleculares entre ambas sustancias, lo que provoca la separación en dos fases dando lugar a una mezcla heterogénea.

Estructura química de la glicerina Estructura química del etanol Estructura química del benceno

Estructura química del agua Estructura química del cloroformo

AQUÍ PONGAN LO DE LOS LÍPIDOS QUE FALTAN… (PRUEBAS DE SOLUBILIDAD)

EXTRACCIÓN DE FOSFOLÍPIDOS

La extracción de los fosfolípidos presentes en la yema de huevo, se llevó a cabo mediante una mezcla de cloroformo-metanol en proporción (2:1). Esto fue con la finalidad de separar las proteínas presentes en la yema de los lípidos y carbohidratos. La separación se logró gracias a la diferencia de polaridades entre las proteínas y los lípidos, así como la similitud de polaridades entre los lípidos contenidos en la muestra y la polaridad de los solventes, puesto que la gran mayoría de los lípidos son solubles en disolventes orgánicos.

Al verter la mezcla en el embudo de separación, se obtuvieron dos fases, en la orgánica estaban contenidos los lípidos de la yema del huevo, mientras que la fase acuosa contenía algunos péptidos y aminoácidos presentes en la muestra. Por lo tanto, la parte que nos interesa es la orgánica, la cual fue utilizada para realizar la separación de dichos lípidos haciendo uso de una cromatografía bidimensional en capa fina.

PREPARACIÓN DE LAS CÁMARAS CROMATOGRÁFICAS

La primera cámara utilizada contenía 100 mL de una mezcla de cloroformo-metanol en proporción (1:1), la segunda cámara contenía una mezcla de cloroformo-metanol-ácido acético-agua en proporción (65:25:8:4).

Características de los disolventes:

Agua: polar Metanol: Polar Ácido acético: Polar

Cloroformo: No polar

Las propiedades químicas de los ácidos grasos derivan por una parte, de la presencia de un grupo carboxilo, y por otra parte de la existencia de una cadena hidrocarbonada. La coexistencia de ambos componentes en la misma molécula, convierte a los ácidos grasos en moléculas débilmente anfipáticas (el grupo COOH es hidrofílico y la cadena hidrocarbonada es hidrofóbica). El carácter anfipático es tanto mayor cuanto menor es la longitud de la cadena hidrocarbonada. La solubilidad en agua decrece a medida que aumenta la longitud de la cadena. Debido a que la cadena hidrocarbonada de los lípidos presentes en la yema del huevo no es tan corta, se utilizaron mayoritariamente disolventes polares en las cámaras cromatográficas, puesto que dichos lípidos tienen muy poca solubilidad en ellos lo que permite que sean arrastrados en la placa cromatográfica. La finalidad de esta mezcla de disolventes es aumentar o disminuir la solubilidad de algunos compuestos presentes en la muestra. (Trudy, 2009)

SEPARACIÓN DE LÍPIDOS MEDIANTE LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA BIDIMENSIONAL

La cromatografía en capa fina es

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