Toma de muestras para exámenes parasitológicos.

Clase práctica N0. 2

Tema: Toma de muestras para exámenes parasitológicos.

Materiales necesarios para la obtención de heces fecales

- Guantes.

- Potes o frascos de vidrio de boca ancha, con tapa, también pueden usarse bolsitas de polietileno.

- Planilla que recoja los datos necesarios.

Método de obtención de las muestras

- En rumiantes y équidos es necesaria la sujeción del animal para luego proceder a la extracción, evitando dañar las paredes del recto. Por lo menos la mano con que se manipule las muestras debe estar enguantada.

En pequeños rumiantes la extracción se ejecuta con dos dedos (índice y medio).

- Cuando se trata de conejos, se coloca al animal en posición decúbito supino y se hace presión en la región abdominal, lo que provoca la salida de cierto número de sirles (bolitas).

- En las aves es rara la aplicación de métodos de diagnóstico coprológico, ya que es más adecuado y económico la autopsia.

- En los carnívoros es mejor obtener las heces fecales cuando defecan por voluntad propia, sobre e una superficie limpia.

El volumen de la muestra estará determinado por los métodos que se vayan a emplear para diagnosticar, pero en general, 30-40g son suficientes.

2.4 Conservación y envió de las muestras

Existen ciertos principios que son comunes para la conservación de casi todo tipo de muestras.

1. Limpieza de los recipientes o uso de recipientes desechables.

2. Tapado lo más hermético posible.

3. Refrigeración. Siempre que debamos guardar las muestras por más de 2 ó 3 horas (sobre todo en climas cálidos), debemos ponerlas en frio.

4. En caso de muestras de sangre, hay que evitar en lo posible los movimientos bruscos y agitación de las mismas que pueden causar hemolisis.

5. Según el tipo de análisis que se desee (individual o colectivo) debemos enumerar o no cada recipiente en forma clara.

6. Cuanto más se acorte el tiempo entre la obtención de la muestra y su envió y procesamiento, tanto más óptimos serán los resultados.

2.5 Datos adjuntos

Los datos adjuntos que comúnmente exige toda reseña para el laboratorio son:

1. Región de donde proceden las muestras.

2. Especie animal.

3. Categoría según la edad.

4. Muestra y tipo de diagnóstico.

5. Número de identificación del animal en correspondencia con el recipiente que la contiene.

6. En caso de existir manifestaciones clínicas y como regla general es importante enviar adjuntos datos acerca del cuadro sintomatológico y datos epizootiológicos en relación con la enfermedad de cuya presencia se sospecha.

2.6 Control de la documentación en el laboratorio

Los laboratorios regionales, provinciales y nacionales y aquellos cuya actividad es docente o investigativa llevan libros de control mensual y anual de los resultados. Esto tiene vital importancia por cuanto los resultados tienen no solo un valor momentáneo, sino que su análisis mensual, anual, quinquenal, etc., permite valorar epizootiológicamente la evolución del parasitismo por los distintos agentes en determinada región o a nivel nacional.

Por medio del análisis estadístico de lo anteriormente señalado se puede evaluar el grado de eficacia de los planes de lucha y control y en base a ello orientar nuevas medias o mantener las existentes.

En general los libros de control recogen aquellos datos relativos a la reseña de los animales, como: lugar de procedencia, especie, categoría etaria y tipos de diagnóstico, a los que suman los resultados con respecto a los distintos parásitos.

Clase práctica N. 3

Tema: Método de diagnóstico coprológico

I. SUMARIO

3.1 Método a simple vista.

3.1.2 Examen por tamizaje.

3.3 Métodos microscópicos.

3.3.1 Examen del preparado nativo.

3.3.2 Métodos de enriquecimiento o de concentración.

- Método helminto-ovoscópico de flotación.

- Método helminto-ovoscópico de sedimentación.

- Método helminto-larvoscópico de Baerman.

- Método helminto-larvoscópico de Vajda.

- Método del cultivo larvario.

II. Objetivos

General:

- Ejecutar adecuadamente los principales métodos de diagnósticos parasitológico directo con heces fecales dominando los fundamentos y objetivos de cada uno.

Específicos:

- Desarrollar metodología adecuada para las técnicas de diagnóstico.

- Identificar las formas de dispersión según sus características.

III. Introducción teóricos.

Los métodos directos son aquellos en que el diagnóstico se realiza en base a la observación de los parásitos o de sus formas de dispersión. (Segmentos, huevos, larvas o quistes). Varios de estos métodos se emplean para diagnosticar en las heces fecales.

3.1 método a simple vista

Es aquel que se efectúa mediante la observación de los parásitos o segmentos de los mismos expulsados o por medio de la necropsia. Esto es posible mediante la observación de la morfología característica de algunos parásitos teniendo en cuenta la especie animal que ha expulsado las formaciones o que ha sido autopsiada.

Ejemplo: Fasciola hepática

Áscaris suum

3.3.2 Métodos de enriquecimiento o de concentración

Estos métodos son los más empleados en la práctica y tienen por objetivo la concentración de las formas parasitarias (huevos, larvas o quistes) que se encuentran dispersos en la muestra, en una superficie lo más pequeña posible.

Método helminto-ovoscopico de flotación

Este método se fundamenta en el hecho de que cuando se mezclan las heces fecales con una solución de elevado peso específico los huevos de los parásitos presentes flotan en la superficie, pudiendo observarse fácilmente huevos de helmintos de bajo peso específico y ooquistes de coccidios.

Pueden utilizarse para la ejecución de este método diferentes soluciones como: solución saturada de cloruro de sodio o solución de sacarosa con densidad de 1.200 y 1.300 respectivamente.

La solución más utilizada en los laboratorios de diagnóstico es la sacarosa, cuya preparación se describe a continuación:

Preparación de la solución de sacarosa (sol. Sheather)

Sacarosa------------------------------------ 1.280 g

Fenol ---------------------------------------- 2 ml

Agua destilada---------------------------- 1000 ml

Disolver 1280 g en azúcar de caña en un litro de agua a 40- 50° y añadir 2 ml de fenol para evitar el crecimiento de hongos y otros microorganismos. Posteriormente se filtra a través de un colador de malla fina o de gasa.

Método de flotación (sheather modificado)

Procedimiento

1. Depositar 3-5 g de heces fecales en un mortero.

2. Agregar 10 ml de solución de sheather.

3. Mezclarlas íntimamente con la mano del mortero.

4. Filtrar a través de una gasa doble o colador de malla fina o tubos de centrifuga.

5. Centrifugar durante 5 minutos a 1000 – 1500 r.p.m.

6. Tomar con un asa de platino o el extremo de un agitador de vidrio una muestra de la superficie de la preparación y depositarla en una lámina portaobjeto. (deben depositarse tres gotas de la preparación, separadas). Luego observar al microscopio.

En caso de no haber centrifuga, los tubos se dejan reposar 45 min.

Para el examen microscopico hay que enfocar la superficie de cada gota y examinarla minuciosamente, en toda su extensión.

En esta superficie pueden hallarse los huevos, pero también otras formaciones tales como grupo de células vegetales, pelillos vegetales, granos de polen, esporas de hongos, burbujas de aire, huevos de ácaros, etc.

Materiales necesarios

• Muestras de heces fecales.

• Un mortero con su mano.

• Colador de malla fina o un pedazo de gasa de 20 x20 cm.

• Recipiente con la solución de flotación.

• Embudo de vidrio.

• Tubos de centrifuga.

• Asa de platino o agitador de vidrio.

• Láminas de portaobjetos.

• Microscopio analítico.

• Centrífuga.

Método helminto-ovoscópico de sedimentación.

Este método se utiliza para diagnosticar huevos de elevado peso específico tales como los trematodos (Fasciola hepática, Paramphistomun spp) y de acantocéfalos (macracanthorhynchus hirudinaceus y otros).

Se basa en la diferencia de peso específico entre los huevos de los parásitos y el agua. Debido al elevado p.e. de los huevos, estos sedimentan en el agua.

Procedimiento:

1. Deposite 5 gramos de heces fecales en un mortero.

2. Mézclelos con agua corriente hasta obtener una mezcla homogénea.

3. Agregue agua de la pila y fíltrelo, a una copa o beaker pequeño, preferiblemente de paredes verticales.

4. Déjelo reposar durante 5-7 minutos y decántelo.

5. Agregue nuevamente agua hasta el borde del recipiente.

6. Déjelo reposar no más de tres minutos y decántelo nuevamente.

Esta acción se repite 4-5 veces hasta obtener un sedimento claro. El tiempo de reposo mínimo debe ser de 2 minutos a partir de la cuarta decantación.

7. Agite el sedimento y viértalo en una placa de petri o vidrio de reloj.

8. Obsérvelo al microscopio con lente de aumento.

Los huevos de los helmintos señalados tienen un tamaño considerable y hay que buscarlos no en la superficie del agua sino en el fondo.

Materiales necesarios.

• Muestras de heces fecales.

• Mortero con su mano.

• Tamiz de malla fina.

• Agua corriente.

• Beaker (de paredes verticales). Con frecuencia se utilizan copas cónicas, pero se corre el riesgo de que los huevos queden adheridos a las paredes.

• Placa petri pequeña o vidrio reloj.

• Laminas portaobjetos y cubreobjetos.

• Microscopio analítico.

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