TECNICAS DE PREPARACION DE MUESTRAS PARA EL EXAMEN PARASITOLOGICO EN HECES Y SANGRE

PRACTICA Nº 02

I. INTRODUCCION

El examen parasitológico de heces conocido como examen coproparasitorio, es una conjunto de técnicas diagnósticas que constituyen la indicación metodológica para la identificación de la mayoría de las enteroparasitosis causadas por protozoarios o helmintos. La indicación de un examen coproparasitorio, debe tener en cuenta las características del cuadro clínico que presenta el paciente, y debe atender al parasito que se sospecha, teniendo como premisa que esta metodología es útil para protozoarios y helmintos, cuyas formas evolutivas (trofozoitos, quistes, o quistes, huevos, larvas, adultos) se emiten con las materias fecales.

Examen Parasitológico Directo: Este método permite buscar principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas móviles de parásitos de tamaño microscópico (trofozoitos, quistes de protozoos. Entamoeba histolytica, Giardialamblia (duodenalis), Balantidiumcolietc, asi como larvas o huevos de helmintos: Strongyloidesstercolaris, Ancylostomaduodanale, Necatoramericanus, Paragonimus, Fasciolaetc).

Método de Graham (Raspado Perianal): Esta técnica se basa en que la hembra adulta de Enterobiusvermicularis habitualmente no de posita sus huevos en el interior del intestino, sino que por lo general emigra durante la noche, hacia las márgenes de ano, depositando los huevos en los pliegues perianales.

II. OBJETIVOS

• Adiestrar al alumno en la preparación de muestras parasitologias.

• Diferenciar y observar las muestras parasitologicas en heces y en sangre.

III. MARCO TEORICO

La Parasitología es una disciplina que estudia a organismos eucariontes que viven a expensas de un huésped, al que le pueden producir daño. Comprende agentes biológicos de diferentes formas y tamaño, los parásitos se dividen en tres grandes grupos: protozoos, helmintos y artrópodos. La importancia de la disciplina radica en la gran prevalencia de las infecciones en humanos y animales, en la cantidad y heterogeneidad de los agentes biológicos, en la diversidad de los ciclos biológicos, y en la distribución geográfica de éstos agentes en el mundo.

La presencia de una infección parasitaria se asocia en forma estrecha a factores geográficos y climáticos, así como a factores antropológicos y sociales de las poblaciones humanas. Actualmente la importancia de las parasitosis ha aumentado con la presencia de inmunodeprimidos, y con el aumento de poblaciones migrantes y de viajeros.

IV. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

• Microscopio

• Centrifuga

• Laminas portaobjetos

• Laminas cubreobjetos

• Pipetas Pasteur

• Aplicadores de Madera

• Solución Salina isotónica

• Lugol

• Sol. satur. Sal al 38%

V. PROCEDIMIENTO

MUESTRA EN SANGRE

Técnica del extendido

a) Se tomo una muestra de sangre capilar del dedo de la mano por punción con una lanceta.

b) Se deposito una gota de sangre en uno de los extremos del portaobjetos, con el borde de otro porta se realiza la extensión de la sangre.

c) Se movió rápidamente este segundo porta el cual se formo un ángulo de aprox.45 grados a fin de obtener un extendido delgado y homogéneo.

Fijación

Se hiso el frotis luego de secado al medio ambiente, se fijo agregando alcohol metílico por 5min.

Coloración Wringth

a) Se cubrió el frotis fijado con el colorante por 1 minuto.

b) Se adiciono agua destilada gota a gota hasta que apareció una nata metálica. Luego se espero por 10 minutos.

c) Se lavo el frotis con agua destilada.

d) Se elimino el agua y se seco al aire.

e) Se observo con objetivo de inmersión.

Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X.

Técnica gota gruesa

a) Se coloco una o dos gotas de sangre en un portaobjetos limpio.

b) Se extendió la sangre, mediante movimientos circulares y concéntricos con el ángulo de una lámina, hasta desfibrinarla y darle un espesor uniforme.

c) Se coloco la lámina en posición horizontal y se dejo secar al aire.

d) Se cubrió la muestra con solución de Wright (colorante x 500ml y se dejo actuar el colorante por 10 a 30 minutos.

e) Se elimino el exceso de colorante y se lavo la lámina con un chorro de agua, con el cuidado de no desprender la muestra.

f) Se dejo secar en posición vertical.

MUESTRA DE HECES

EXAMEN MACROSCOPICO

Se Observo las características de las heces como:

Olor característico

color Café oscuro

consistencia Semisólida, Pastosa

aspecto normal

EXAMEN MICROSCOPICO

EXAMEN PARASITOLOGICO DIRECTO

a) En un porta objetos limpio, se coloco separadamente, una gota de solución salina y otra de lugol.

b) Con el aplicador de madera se tomo una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solución, con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos, procurando hacer una suspensión no un frotis.

c) Se coloco el cubre objetos.

d) Se repitió esta operación en la gota de lugol.

e) Se observo al microscopio con objetivo de v 10x y 40x. se recorrió la lámina siguiendo un sentido direccional, ejemplo: de derecha a izquierda, o de arriba abajo.

EXAMEN PARASITOLOGICO CONCENTRADO

Técnica de willis – Molloy (sol. Satur Sal al 38%)

a) Esta técnica requiere solución saturada de sal, la cual se obtiene mezclando 38g de sal de cocina en 100ml de agua caliente o calentar la mezcla a fin de homogenizarla.

b) Desmenuzar con la ayuda de una baqueta 1 o 2g de heces en un tubo de ensayo la cual contenía aproximadamente 4ml de solución aturada de sal.

c) Se adiciono la misma solución hasta formar un menisco sobre el borde del tubo.

d) Se cubrió el menisco del tubo o frasco con una laminilla evitando la formación de burbujas.

e) Se dejo en reposo durante 15 a 20 minutos para que los huevos y quistes de parasito

f) floten y adhieran por viscosidad a la laminilla.

g) Se deposito una gota de lugol en una lámina portaobjetos y sobre ella se coloco la laminilla.

h) Se observo al microscopio.

Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X. (Etamoeba coli)

VI. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Los distintos modos de recolección presentan ventajas y desventajas. Las heces frescas permiten ver la movilidad de los protozoos y larvas de helmintos. Las que tienen conservantes permite obtener parásitos que se eliminan de manera intermitente, aunque Trichomonas hominis no se detecta con conservantes.

Las heces recogidas luego de la administración de un purgante salino, permiten el diagnóstico más rápido, pero no puede realizarse en personas con dolores intestinales, diarrea o en quienes estén contraindicados los purgantes. La muestra debe ser procesada rápidamente. Permite ver la movilidad de los protozoos y se logra una mejor visualización de los macroparásitos dado que en el tamizado aparecen pocos restos debido a la no-ingestión de verduras, legumbres y frutas.

La recolección seriada de las heces puede darse a todos los pacientes y al recoger durante 8 días aumenta la posibilidad de hallar los parásitos que tengan un ciclo más largo y que puedan completarlo durante la recolección. Esta recolección es engorrosa para el paciente; el formol inmoviliza a los protozoos pero conservan su morfología lo que hace posible su diagnóstico.

Una vez remitidas al laboratorio las muestras obtenidas como se ha señalado anteriormente se procede al análisis parasitológico.

VII. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

• Se aprendió a adiestrar en las muestras parasitologicas las diferentes técnicas

• Se aprendió a diferenciar y observar al microscopio las muestras parasitologicas en heces y en sangre

Recomendaciones.

-Aunque los extendidos fueron fijados previamente, por razones de bioseguridad se aconseja su manipulación con guantes.

-verificar tanto antes de agregar el colorante como antes de poner la gota de aceite de inmersión que se esté trabajando sobre el lado del portaobjetos en que se realizó el extendido.

-al teñir, tratar que el colorante cubra uniformemente toda la superficie del preparado.

-manipular el material de forma tal de minimizar salpicaduras de colorante; limpiar la mesada manchada con alcohol 70º.inmediatamente.

Las muestras de heces pueden ser recogidas de varias maneras:

Heces frescas sin conservantes: Si el paciente presenta deposiciones líquidas o heces con moco y sangre, se debe examinar rápidamente una muestra de las mismas siempre que no haya tomado carbón, crema de bismuto, sustancias baritadas o esté medicado con hierro.

Heces

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