Explica cómo se clasifican los leucocitos en función del colorante

Tema 1: Hematología                Bloque I: Laboratorio                Marina Llabrés Tugores

SUPUESTO PRÁCTICO 1

Los glóbulos blancos o leucocitos, son las células sanguíneas con núcleo. Fueron teñidas por primera vez en el siglo XIX, por Ehrlich Pappenheim, clasificándolas por su coloración y características nucleares. Explique cómo se clasifican según su comportamiento ante el colorante. 

Los glóbulos blancos o leucocitos son un conjunto heterogéneo de células móviles de la sangre. Los leucocitos, así como eritrocitos y plaquetas; se forman en el hígado y en el bazo del feto. Después del nacimiento, esta función pasa a ser parte de la médula ósea, un tejido esponjoso que se encuentra dentro de los huesos, a partir de una célula madre hematopoyética llamada stem cell.

Los leucocitos son los representantes hemáticos de la serie blanca. A diferencia de los eritrocitos (glóbulos rojos), no contienen pigmentos; por lo que se clasifican como glóbulos blancos. Son células con núcleo, mitocondrias y otros orgánulos celulares. Los leucocitos tienen la capacidad de movilizarse a distintas partes del cuerpo mediante un mecanismo llamado diapédesis, que se define como el proceso de salida de elementos formes de la sangre - principalmente leucocitos - a través de las paredes íntegras de los vasos. En respuesta a su contacto con factores quimiotácticos, las células endoteliales y fagocíticas incrementan la síntesis de sus proteínas de adhesión. Esto propicia que los fagocitos se adhieran a la superficie de los vasos y rueden sobre ellos hasta poder salir entre las uniones intercelulares. Este proceso les permite desplazarse por fuera de los vasos sanguíneos y tener contacto con tejidos del interior del organismo, donde pueden llevar a cabo sus funciones.

Los leucocitos forman parte del sistema inmunitario del cuerpo y se encargan sobre todo de combatir infecciones, ya sean causadas por agentes infecciosos - antígenos - o sustancias extrañas; así como otras enfermedades. Algunos leucocitos migran a los tejidos del organismo para residir ahí permanentemente y no se encuentran en la circulación sanguínea. Estos leucocitos que han migrado a los tejidos tienen nombres específicos dependiendo de en qué tejido se instalen, como por ejemplo los macrófagos fijos del hígado, que se llaman células de Kupffer. Otras son, por ejemplo, los histiocitos, microglía o mastocitos o células cebadas. Estas células juegan un papel muy importante en el sistema inmune.

Podemos clasificar a los leucocitos en dos grupos (Figura 1), dependiendo de si tienen o no gránulos. Los leucocitos granulocitos son los neutrófilos, eosinófilos y basófilos. Por otra parte, los leucocitos agranulocitos son los monocitos y linfocitos (células T y B). Los gránulos son específicos de cada tipo celular. Contienen agentes bactericidas y enzimas para destruir a agentes patógenos (como peroxidasa, lisozima, colagenasa, hidrolasa, elastasa, lipasas, etc), citoquinas y quimiocinas (mediadores de la inflamación).

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Figura 1. Clasificación leucocitos.

Para poder clasificar y estudiar correctamente la morfología de los diferentes tipos de leucocitos, se usan tinciones hematológicas. Se define como tinción al proceso mediante el cual tanto las células como el entorno que las rodea se colorean, incrementando el contraste y permitiendo así visualizar mejor las células en un microscopio.

La tinción de May Grunwald-Giemsa o Pappenheim es una técnica de coloración diferencial que mezcla los reactivos Giemsa y May Grunwald. Es utilizada para la diferenciación de células sanguíneas normales y anormales en frotis de sangre periférica y médula ósea, así como para la tinción de cortes histológicos y muestras citológicas. Una de las características que poseen los colorantes utilizados en este tipo de tinciones, es su alta sensibilidad ante cambios de pH, de forma que existe afinidad entre estos y las estructuras celulares.

La técnica de la tinción de Pappenheim se basa en el fundamento de las tinciones de Romanowsky, en las que se combinan colorantes ácidos y básicos. Los colorantes ácidos (con cargas eléctricas negativas) tienen afinidad selectiva por los componentes básicos de las células, que tienen cargas eléctricas positivas. Por otra parte, los colorantes básicos como el azul de metileno, están cargados positivamente y son atraídos por estructuras cargadas negativamente, es decir, estructuras ácidas. Es por ello por lo que el azul de metileno tiñe de azul los núcleos de las células (ricos en material genético, ya sea ARN o ADN), ya que poseen grupos fosfato cargados negativamente. Por otra parte, el colorante ácido (normalmente se usa eosina) tiene carga negativa, por lo que tiñe a los eritrocitos y los gránulos de los eosinófilos de color rosado.

En primer lugar, se realiza un frotis de sangre periférica en un portaobjetos. Se deja secar al aire libre en posición vertical. A continuación, se colocan en posición horizontal y se cubren y se fijan con solución de May-Grünwald. A continuación, para la tinción se añade la misma cantidad de Aqua Bidest, se mezcla cuidadosamente y el frotis se recubre usando una solución de Giemsa (1 gota de solución Giemsa/1 ml de solución en polvo Weisesche) sin lavar previamente. Lavar con Aqua Bidest transcurridos 10 minutos y colocar los frotis con el extremo delgado inclinado hacia arriba. Limpiar la parte posterior inmediatamente, usar etanol o metanol si es necesario y secar al aire.

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