MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL PROCESAMIENTO, CORTE, COLORACIÓN Y ARCHIVO DE TEJIDOS HISTOLOGICOS Y CITOLOGÍAS

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL PROCESAMIENTO, CORTE, COLORACIÓN Y ARCHIVO DE TEJIDOS HISTOLOGICOS Y CITOLOGÍAS EN EL LABORATORIODE PATOLOGÍA-HUV.

AREA DE HISTOLOGÍA.

Definición:

Dependencia que hace parte del laboratorio de Patología en el HUV, la cual se encarga de la recepción, procesamiento, inclusión, corte, tinción, montaje y entrega de las muestras quirúrgicas enviadas por los residentes desde la sección de macroscopía.

RECEPCIÓN Y PROCESAMIENTO DE ESPECÍMENES

Definición:

Es el recibo que   hace el tecnólogo medico de las muestras enviadas por el área de macroscopía, para su procesamiento en equipo (procesador de tejidos), en la sección de Histología.

Equipos e insumos.

• Contenedor de plástico con formol al 10%
• Muestras en canastillas.
• Guantes quirúrgicos.
• Agua corriente.
• Alcohol etanol (al 95%).
• Alcohol Isopropanol.
• Xilol.
• Formol.
• Carbón activado.
• Parafina.
• Procesador de tejidos.

Procedimientos:

• Póngase guantes quirúrgicos.
• Tome el contenedor de plástico y proceda a lavar ligeramente las canastillas con agua corriente, observando que las canastillas estén bien cerradas.
• Tome las canastillas con tejidos, una a  una y vaya colocándolas en ordenen la canasta del procesador de tejidos dispuesta para esta actividad y que se encuentran dentro de la retorta del procesador de tejidos.
• Observe en la guía que está ubicada en la pared frente al procesador de tejidos, en qué programa se debe poner a procesar los tejidos, (Si es 1-2- o 3) según el caso.
• Ponga en la retorta del procesador de tejidos, las canastas con las muestras; cierre y asegure la tapa de la retorta.
• Proceda a dar la orden al equipo.
• Observe que el equipo haya recibido la orden correcta y espere a que inicie su ciclo.
• En el procesador de tejidos el ciclo se iniciara en alcohol al 70%. Continuando con alcohol al 80%, 90% y 96%. Después pasara a 4 cambios de alcohol al 100% (Isopropanol). Al concluir con el Isopropanol continuara con 4 cambios en Xilol. Después del Xilol se harán 4 cambios de parafina quedando sumergidas en la cuarta parafina hasta ser retiradas del equipo. Nota. El ciclo del procesador se hacen todos los líquidos a 35 grados y vacío dentro del equipo para asegurar una mejor difusión de los líquidos dentro de los tejidos.
• Después de 12 horas de procesamiento de las muestras, sáquelas de la retorta del equipo y llévelas a los baños de parafina (deben   estar a 60 grados).
• Devuelva las canastas sin canastillas a la retorta, cierre la tapa y ordene al procesador para que inicie el ciclo de lavado de la retorta y las canastas.

Recomendaciones:

• Observe que  el equipo( procesador  de  tejidos), tenga  todos  sus  recipientes con  los  diferentes  sustancias que  intervienen en la deshidratación  de  los  tejidos, limpios y al nivel requerido.
• Cambie los líquidos cuando considere que ha procesado un numero plural de muestras.

INCLUSION DE TEJIDOS

Definición:

Es el procedimiento mediante el cual se toman los tejidos ya procesados y se incluyen en parafina líquida en moldes, según el tamaño de la muestra enviada. (3*4, 2.5*2.5 y 1/2 * 1/2)

Equipo e insumos:

• Parafina líquida. (Que esté a temperatura entre 55- 60 grados).
• Baños de parafina.
• Dispensadores de parafina.
• Nevera congelador (temperatura a   menos 30 grados).
• Termómetro.
• Pinzas de disección.
• Moldes de inclusión.
• Anillos o casetes para inclusión.
• Marcadores punta fina, tinta indeleble.
• Lápiz de grafito.
• Libro de actas de registro.
• Cubetas en acero inoxidable con hielo.

Procedimiento:

• Tome una  a  una las  canastillas,  ábrala, observe  el rótulo con  el número de  registro y escriba  ese  número  en el anillo de  inclusión, en caso  de  que  se  esté  trabajando con  esta  forma de inclusión.
• Tome  el espécimen con la  pinza  y sumérjalo de forma adecuada según  las  normas técnicas de  inclusión, ponga el anillo sobre  el molde  y  rellene este con  parafina líquida, ponga la tirilla de  papel con número de  registro y   deje enfriar.
• Si por el contrario utiliza en  la  inclusión  parte  de  la canastilla(casete), proceda a colocar  el espécimen en  el molde según  las normas técnicas de  inclusión, ponga   el casete, la  tirilla de papel con  número de registro y  rellene  con  parafina líquida el molde y deje  enfriar.
• Terminado el proceso de inclusión de las muestras, proceda a sacarlas del molde, una vez la parafina esté fría y sólida.
• Limpie los bloques de parafina de restos sobrantes.
• Ordene los bloques según código de registro enviado.
• Haga el listado en libro de actas de registro, siguiendo el orden consecutivo y codificación de envío.
• Rotule los bloques según el consecutivo de la lista elaborada.
• Ponga los bloques en las cubetas de acero inoxidable con hielo, siguiendo el orden de la lista.

Recomendaciones:

• Las muestras se incluyen según el tamaño enviado por macroscopía, en los moldes grandes, medianos y pequeños.
• Al terminar limpie y ordene los utensilios, mesón y demás implementos utilizados en esta actividad.
• Observe que los baños de parafina y dispensadores estén limpios y con la cantidad de parafina requerida para la misma actividad al día siguiente.

ROTULACION DE LAMINAS PORTAOJBETO.

Es la actividad por medio de la cual se escribe en uno de los extremos de la   lámina portaobjeto con lápiz punta diamante, el número de registro del espécimen.

Equipo e insumos:

• Lápiz punta diamante
• Laminas portaobjeto
• Canastillas contenedoras de láminas.

Procedimiento:

• Tome el libro de registro y mire el número de muestras matriculadas del día.
• Tome la cantidad de láminas requeridas según el libro de registro.
• Escriba una a una,  en  las láminas de vidrio con lápiz  punta  diamante,  el año y  código de  registro según  lo  establecido en  el libro de  actas y  siguiendo el consecutivo.

• Tome las láminas de vidrio ya rotuladas y póngalas en las canastillas contenedoras.

CORTE, DESPARAFINIZACIÓN Y FIJACIÓN DE TEJIDOS

Definición.

Es la actividad por medio de la cual se toman los tejidos en bloques de parafina, uno a uno y se van cortando en el micrótomo, se recogenen láminas portaobjeto y se llevan al horno para su respectiva eliminación de la parafina y fijación del tejido.

Equipos e insumos:

• Micrótomo.
• Cuchillas desechables de alto y bajo perfil.( se  usan  de  acuerdo al tipo  de  espécimen)
• Baños de flotación.
• Horno para desparafinización.
• Pinceles de cerda suave.
• Termómetro.
• Agua corriente.
• Gelatina sin sabor.
• Papel periódico.

Procedimiento:

• Llene con agua corriente los baños de flotación, préndalos y prográmelos a una temperatura de 55 – 60 grados centígrados, según la necesidad.
• Adicione al agua la gelatina sin sabor (0.05 grs por 2500 ml).
• Tenga a mano los bloquesen las cubetascon hielo, las láminas, los pinceles, las cuchillas y demás implementos para la tarea de cortar.
• Siéntese para empezar el corte.
• Coloque la cuchilla en el adaptador de cuchillas del micrótomo.
• Revise el angulo de corte y el micraje del micrótomo.
• Tome la primera lámina portaobjetos y el bloque, observe y compare el número de registro en la lámina como el del bloque; asegúrese de que correspondan ambos números.
• Proceda a poner el bloque en el micrótomo para su corte.
• Haga el desbaste del tejido adecuadamente,teniendo en cuenta las especificaciones técnicas.
• Elija el corte óptimo, tómelo con el pincel y póngalo en el baño de flotación.
• Recoja en la lámina portaobjeto el tejido que se encuentra en el baño de flotación y llévelo a la canastilla contenedora.
• Limpie el agua del baño de flotación, de todo residuo de tejido flotante, con una porción de papel periódico definida para tal fin, para evitar y prevenir contaminaciones.
• Proceda de la misma forma con la siguiente placa y bloque hasta terminar con todas las muestras programadas para el corte.
• Una  vez termine  de  cortar lleve  las canastillas con  las  láminas y tejidos  cortados al horno  para  el  desparafinado y fijación;  deje allí por 30 minutos,  a una  temperatura máxima de  60 grados centígrados.
• Una  vez  termine  de cortar  todas  las  muestra, recoja y tire  los  restos de  parafina en  el recipiente  de desechos  para  tal  fin.
• Retire la cuchilla del micrótomo, limpie los restos de parafina del micrótomo, limpie y ordene los demás implementos usados para el corte.

• Recolecte en una caja dedicada para tal fin los bloques cortados, en el orden en que se cortaron y llévelos al área de archivo de bloques.

Recomendaciones:

• Los baños de flotación se deben cambiar diariamente, lavándolos y suministrándoles agua corriente y gelatina, para cada corte programado.
• Los baños de flotación se deben poner  a  funcionar a  primera  hora de la mañana,  para  que  el  agua con  la gelatina  a  la hora del corte estén  a la temperatura optima  requerida.
• Se debe monitorear la temperatura de los baños regularmente.
• Se debe observarque los micrótomos estén ajustados y con la angulación apropiada para el corte.
• El corte se debe realizar ente tresy cinco micras, dependiendo de la calidad y características del tejido enviado y de las especificaciones técnicas.
• El desbaste de las muestras se hace de acuerdo al tamaño y conformación del tejido; hay variaciones entre biopsias, quirúrgicas y autopsias.

TINCION DE TEJIDOS

Definición:

Es la actividad mediante la cual se toman las canastillas con láminas y tejidos   desparafinados, para su hidratación, coloración y deshidratación, sumergiéndolas en diferentes sustancias químicas y colorantes.

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