REACCION DE NIHIDRINA

REACCION DE NIHIDRINA.

La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos2 Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.3

Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteinas, pero si hay aminoacidos libres.4

[editar] Reactividad

El átomo de carbono de un carbonilo tiene una carga positiva parcial, por lo que el C central de de un 1,2,3-tricarbonilo es menos estable y más electrofílico que una cetona simple. En la mayoría de los compuestos, un carbonilo es más estable que la forma dihidroxi (hidrato). Sin embargo, la ninhidrina es un hidrato de carbono estable del C central porque esta forma no tiene el efecto desestabilizador de los centros adyacentes de carbonilo parciales positivos. El indano-1 ,2,3 -triona reacciona rápidamente con nucleófilos.

Tenga en cuenta que con el fin de generar la ninhidrina cromóforo, la amina se condensa con una molécula de ninhidrina para dar una base de Schiff. Así pues, sólo amonia y aminas primarias proceden más allá de este paso. En este paso, debe haber también un protón alfa (* H en el diagrama) para la transferencia de base de Schiff, por lo que una amina adyacente a un carbono terciario no puede ser detectada por la prueba de ninhidrina. La reacción de ninhidrina con aminas secundarias da una sal de iminio, que es también de color, y esto es generalmente de color amarillo-anaranjado en color.

Es una de las reacciones mas sensibles para identificar aminoacidos en general, ya que detecta una parte de aminoacido en 1 500 000 partes de agua. Aminoacidos y muchas aminas primarias dan un color violeta caracteristico. La prolina da coloracion amarilla. Por su sensibilidad esta reacción se emplea para valoracion cuantitativa de amonoacidos por colorimetria. La valoracion de aminoacidos en orina, por ejemplo, tiene importancia en medicina ya que en algunas enfermedades como hepatopatias, infecciones agudas o diabetes mellitus en las que se presente hiperaminoacidemia, estas se ven acompañadas por aminoaciduria paralela. Algunas enfermedades metabolicas congenitas dan lugar a la eliminacion anormal de algunos aminoacidos en la orina (p ej fenilcetonuria).

RESULTADOS DE LA PRACTICA DE BIOKIMICA

los aminoacidos hacen que se de el resultado positivo

reaccion hopkins:

albumina: formacion de un halo, separacion de dos faces 1 face blanquesido 2 morado 3 transparente

Lisina: no se produjo niingun cambio permanecio transparente

A.glutamico: no se produjo cambio prueba negativa

Caseina: se torno de un color amarillento

Tirosina: se produjo un verde seco (pantano)

Triptofano: se formo en la parte inferior del tubo un color cafe-guinda (halo ) muy grueso

Cisteina: negativo

Phe: negativo

prueba xantoproteica al calentar con ac. nitrico

Arginina: negativo

a.glutamico: negativa

lisina: negativo

Albumina: negativo

Triptofano: de amarillo a rojo guinda tabique positivo

tirosina: negativo

: cisteina: negativo

Caseina: presipitado color verde positivo.

al añadir NaOH al 10 molar

Arginina: verde seco claro

A. glutamico: verde seco

Lisina: verde seco

Phe: verde seco

Albumina: amarillo a naranja

Triptofano: se torno cafe marron

Tirosina: se torno rojo ladrillo

Cisteina: verde seco claro

Caseina: anaranjado claro

Valoración con ninhidrina.

Esta reacción es la más utilizada para revelar aminoácidos o péptidos en las cromatografías en capa fina. La ninhidrina es el hidrato de tricetohidrindeno, y es un oxidante muy fuerte que provoca la descarboxilación oxidativa y desaminación del aminoácido, formando el aldehído correspondiente, CO2, amonio y una forma reducida de la ninhidrina llamada hidrindantina. En la segunda fase este derivado vuelve a reaccionar con una molécula de ninhidrina para condensarse en presencia de amoniaco y formar una sustancia coloreada llamada púrpura de Rueman, que absorbe a 570 nm. Con los iminoácidos esto no ocurre porque no tienen el grupo amino primario, y lo que se genera es una sustancia amarilla que absorbe a 440 nm. Es una reacción que se puede valorar en un colorímetro porque es proporcional a la cantidad de aminoácido.

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