Tecnica De Muestreo En Crustaceos

TÉCNICAS DE MUESTREO Y DIAGNÓSTICOS DE ENFERMEDADES EN CRUSTÁCEOS.

Métodos de muestreo.

Métodos clásicos.

Dependiendo del tipo de enfermedad, estos métodos pueden ser lo suficientemente específico para alcanzar el diagnóstico definitivo.

1. Historial del caso

2. Apariencia externa y signos clínicos

3. Examen directo del microscopio

4. Microbiología

5. Histología

Métodos moleculares.

Cuando los métodos clásicos no son lo suficientemente específicos y/o sensitivos, es necesario complementarlos con uno o más de los siguientes métodos moleculares:

Pruebas serológicas con antricuerpos monoclonales o policlonales.

• Anticuerpos fluorescentes (AF)

• ELISA (Enzyme linked inmunosorbent assay).

Sondas genéticas (con agente localizador radioactivo o no-radioactivo).

• Hibridaciones tipo “dot blot”

• Hibridaciones tipo “in situ”

Amplificación de ácidos nucleicos (AND o ARN) por medio de la reacción en cadena polimerasa (PCR)

Métodos de diagnósticos.

Anamnesis

En la medida de lo posible el técnico en sanidad responsable de realizar el diagnostico de una enfermedad en una población de camarones, debe incluir una visita a la instalación afectada (maduración, larvicultura o finca de engorde)

Durante esta visita, el técnico debe recopilar la información histórica previa a la aparición del brote de la enfermedad, esto puede incluir cambios en parámetros ambientales o fisicoquímicos, transito inusual de personas por las instalaciones, presencia de animales foráneos al sistema como perros, aves, roedores o vacas, alteraciones en el régimen y tipo/calidad del alimento suministrado, cambios en los procedimientos o tipos de fertilizantes, uso de productos químicos o biológicos en el cultivo afectado, existencia de brotes similares con anterioridad en dicha empresa o en otras conocidas y, toda aquella información pasada o presente relacionada directa o indirectamente con la población en cuestión.

Debe llevarse un registro de esta información obtenida en la empresa, para estudios de correlación con los hallazgos obtenidos en el examen clínico y en las pruebas de laboratorio complementarias que se harán luego de la visita de campo.

Examen clínico:

Cuando se trate de un brote de una enfermedad, durante la visita a las instalaciones deben evaluarse las unidades de producción (tanques o estanques) que presenten problemas. Se deben realizar capturas de camarones in situ y hacer una revisión individual de animales, para formarse una idea aproximada de la proporción del problema: qué tanta población está afectada (prevalencia en %), grado de severidad de las afecciones observadas en los organismos enfermos y qué tipo de enfermedad puede estar causando el brote.

El examen clínico debe incluir un recorrido manual y visual muy cuidadoso de los camarones que sean revisados, los cuales no deben ser capturados al azar, sino seleccionados por presentar alguna manifestación de enfermedad. Con base en los hallazgos de esta valoración clínica, es factible en algunos casos hacer un diagnóstico presuntivo, el cual se debe confirmar con pruebas complementarias de laboratorio.

El número de animales que se debe tomar para realizar un estudio sobre la etiología de enfermedades, está afectado por la habilidad de reconocer camarones enfermos en exámenes generales, la naturaleza del problema presente y por la experiencia del profesional especialista en sanidad acuícola. Cuando se eligen camarones que presenten signos clínicos, 5 a 10 por población examinados individualmente, serán suficientes.

La captura o colección de camarones para realizar un examen que busca determinar la presencia de enfermedad, debe realizarse procurando el mínimo de estrés durante la manipulación de los animales.

Si el examen clínico debe ser realizado en un lugar diferente al de la captura y los camarones deben ser transportados hacia otra parte, la movilización debe hacerse en recipientes con agua del mismo estanque, limpia (sin lodo ni trozos de vegetales), con adecuada aireación y teniendo una densidad baja (para evitar el estrés). Si los camarones van a permanecer un período de tiempo en el recipiente antes de ser examinados, deben tener buena aireación y, en lo posible, se debe bajar la temperatura a 25-27ºC mediante la adición de bolsas con hielo (selladas).

El estudio de los camarones presumiblemente enfermos, se deben animales moribundos, descoloridos, con comportamiento anormal o que presenten otras anormalidades macroscópicas con las cuales se sospeche de una enfermedad. Las principales observaciones que se deben realizar en camarones enfermos durante una valoración clínica, son las siguientes:

 Color del animal

 Tamaño del cuerpo comparado con resto de la población

 Expansión de cromatóforos

 Deformidades en rostro, abdomen

 Color de las branquillas

 Color de los apéndices

 Color de las antenas

 Transparencia de los músculos del abdomen y cefalotórax

 Textura del exoesqueleto

 Presencia de moco sobre la cutícula

 Machas, laceraciones, heridas, zonas oscuras u pacas, astillas clavadas

 En cuanto a manifestaciones de enfermedad en condiciones naturales en los estanques, las siguientes son observaciones frecuentes en camarones enfermos:

 Nado errático

 Letargia y debilidad

 Perdida del reflejo de huida

 Vulnerabilidad a predadores

 Nado superficial susceptibilidad a la hipoxia

 Disminución de la alimentación

Microscopía Directa (Análisis en fresco)

Esta técnica está basada en la observación bajo el microscopio de tejidos o partes de camarones afectados, con el fin de establecer en la medida de lo posible, un diagnostico presuntivo. Las partes más comúnmente examinadas bajo el microscopio son: hepatopáncreas, branquias, contenido intestinal, musculo esquelético y contenido gástrico.

Bacteriología

El objetivo de la bacteriología en camarones es cuantificar la cantidad y el tipo de las bacterias presentes en la hemolinfa, otros tejidos o larvas y postlarvas, así como en agua para el cultivo.

La bacteriología es un conjunto de métodos que se utiliza como apoyo en el diagnóstico de enfermedades en camarones, cuando se sospecha que la causa de la enfermedad está relacionada con presencia de bacterias patógenas en el agua de cultivo o dentro del organismo de los animales. Consiste en la siembra de muestras en diferentes medios de cultivo, para determinar si hay crecimiento o no de bacterias potencialmente patógenas.

Después de definir que poblaciones afectadas se van a examinar, se deben determinar el tipo de muestreo con base en el objetivo de estudio. Los camarones que se van a someter a las pruebas deben estar siempre vivos, no deben estar muertos por que los resultados se verían afectados por los cambios autoliticos.

Antes de iniciar cualquier procedimiento bacteriológico, se deben tener previamente esterilizados todos estos elementos. El material de vidrio se envuelve en papel kraft y se esteriliza por la técnica de calor seco mediante un horno a una temperatura de 180 °C durante un lapso de dos horas.

La toma de muestra para análisis bacteriológico tanto de agua de transporte de nauplios como de los mismos nauplios, se debe realizar, si es posible, en el momento de recibir los animales y directamente en las bolsas o cajas de transporte. La toma de muestra de agua en tanques de larvicultura, se debe realizar al menos en 2 puntos: la entrada del tanque y en el centro del mismo.

En caso de larvas o postlarvas, se debe tomar una cantidad conocida o estimada de animales, con el fin de emitir los resultados en función de las unidades formadas d colonias (UFC) por animal o por gramo de larva o postlarva.

En el coso de camarones juveniles, subadultos o reproductores, se recomienda desinfectar el área de punción (seno cardíaco –dorsal– o seno hemolinfático –ventral–) con trozos de algodón impregnado con etanol 70%. Con una aguja de insulina (1 mL) nueva y estéril que tenga aguja hipodérmica (muy delgada), se extraen al menos 100 μL de hemolinfa. Es importante que si las posibilidades del laboratorio lo permiten, se utilice un anticoagulante cuyo volumen dentro de la jeringa se debe considerar antes de emitir los resultados de los conteos bacterianos en UFC.

Histología

La histología de la rama del saber científico que se ocupa del estudio de los rasgos morfológicos de los tejidos, por medio de instrumentos amplificantes. La histopatología es entonces la ciencia que estudia las modificaciones patológicas

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