Bioquímica.

Bioquímica

EXTRACCION DE ADN A PARTIR DE GERMEN DE TRIGO

E HIDROLISIS ACIDA DEL ADN

Esta es una práctica diseñada como muchas otras actividades por el National Human Genome Research Institut para celebrar en abril de 2003 dos eventos históricos:1) el aniversario número 50 de la propuesta de Watson y Crick relativa a la estructura del ADN, y 2) la terminación esencial en abril de 2003 del proyecto del genoma humano, HGP el cual es un esfuerzo investigativo internacional para determinar la secuencia de la totalidad del genoma humano ( más de tres mil millones de pares de bases puricas y pirimidicas).

PROCEDIMIENTO

Ponga un gramo de germen de trigo (no tostado) en un vaso de precipitado de 100 ml. Añade 20 ml. De4 agua caliente de la llave (50-60 C), y mezcle constantemente por 3 minutos. Añada 1 ml. De solución de dodecil sulfato de sodio al 20% y mezcle moderadamente por 5 minutos. Inclinando un poco el vaso, lentamente, sin mezclar, vierta por la pared del vaso 14 ml de etanol al 95%. No mezcle las dos capas resultantes. Observe que el ADN precipita en la interface, es decir en la superficie de contacto entre el agua y el etanol.

Deje reposar el material por unos cuantos minutos. Note que principia a aparecer en la interface el ADN, o sea un material blanco en forma de de película y hebras. Si deja reposar la preparación, el ADN flotara en la superficie del alcohol.

(Usando un agitador de vidrio, usted puede mover suavemente la fase acuosa para que el agua entre en contacto con el etanol. De esa manera se produce más ADN). Use una cucharita de plástico para sacar el ADN.

HIDROLISIS DE ADN

De vaso de precipitado tomar una pequeña porción de ADN y colocarlo en un vaso de precipitado seco de 100 ml.

Agréguele 30 ml de HCL ácido clorhídrico 0.5 N agitar y hervir durante 15 minutos, dejar enfriar y realizar las siguientes pruebas:

PRUEBA PARA LA PRESENCIA DE FOSFORO (P)

Tomar una muestra de 2 ml de ADN hidrolizada, colocarla en un tubo de ensayo y añadir 1 ml de ácido a amino naftol sinfónico y 1 ml de molibdato de amonio; calentar en baño María hasta aparición de color azul que indica presencia de fosforo.

PRUEBA PARA PRESENCIA DE DESAXIRRIBOSA

Tomar una muestra de 1 ml de ADN hidrolizada y colocarla en un tubo de ensayo, agregar un ml de reactivo de Bial (para identificar pentosa), calentar en baño de María hasta aparición de color verde que indica presencia de desoxirribosa.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es el germen de trigo?

El germen de trigo es la parte más tierna del

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