Lab Micro

I. OBJETIVOS

• Aprender las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio

• Identificar peligros y riesgos existentes en el laboratorio.

• Valorar la importancia de la bioseguridad en el laboratorio

• Identificar cada una de las partes del microscopio óptico, conocer su función y el cuidado de cada uno de ellas.

• Dominar el mecanismo de iluminación, la observación de una muestra con todos los objetivos.

II. MARCO TEORICO

2.1 BIOSEGURIDAD

La bioseguridad es el conjunto de medidas preventivas de sentido común que tienen la finalidad de proteger la salud, la integridad física, la seguridad de las personas en un ambiente determinado, frente a diferentes riesgos biológicos físicos, psicológicos y mecánicos.

2.1.1 PRINCIPIOS BASICOS DE LA BIOSEGURIDAD

Universalidad: se deben seguir las normas de bioseguridad rutinariamente en todas las situaciones que puedan dar origen a accidentes, estando o no previsto el contacto con sangre o cualquier otro fluido corporal. Estas precauciones deben ser seguidas en todo momento mientras se está dentro del laboratorio

Precauciones estándar: comprende las medidas a tomar para evitar la contaminación de una persona, evitando la exposición directa a sangre y otros fluidos orgánicos potencialmente contaminantes, por ejemplo mediante el uso de barreras, es decir mediante la utilización de materiales adecuados que se interpongan al contacto de los mismos. La utilización de barreras por ejemplo guantes no evitan los accidentes de exposición a estos fluidos, pero disminuyen las consecuencias de dicho accidente

2.1.2 PRECAUCIONES ESTANDAR

- Barreras de protección

- Lavado de manos

- Desinfección y esterilización.

- Manejo de objetos punzo cortantes.

- Manejo y eliminación de desechos

- Ventilación e iluminación adecuadas

- Limpieza y desinfección de ambientes

2.1.3 VÍAS DE CONTAMINACIÓN

1. La boca

• Comer, beber y fumar en el laboratorio.

• Realizar transferencias con pipetas sin utilizar ningún tipo de protección.

2. La piel

• Cortaduras o rasguños.

• Transferencia indirecta de microorganismos a través de los dedos o utensilios contaminados (lápices, bolígrafos, etc.).

3. Los ojos

• Salpicaduras de materiales infecciosos.

• Transferencia indirecta de microorganismos a través de los dedos contaminados.

4. Los pulmones

• Inhalación de microorganismos transportados por el aire (aerosoles).

2.1.4 BARRERAS DE PROTECCION

- Lavado de manos (antes y después)

- Guantes

- Mascarilla o barbijo

- Mandil

- Gorro

2.1.5 NORMAS DE BIOSEGURIDAD

• Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos personales en el lugar que se les indique para tal fin.

• Llevar puesto el mandil de laboratorio en todo momento, que debe permanecer completamente cerrado.

• Limpiar y descontaminar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la sesión práctica.

• Lavar las manos con agua y jabón:

– antes de realizar las actividades programadas

– antes de salir del laboratorio

– después de usar materiales contaminantes.

• Recoger el cabello largo.

• Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar sólo lo indispensable.

• No comer, beber, fumar.

• Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las actividades indicadas en la práctica. Si usted tiene alguna duda, diríjase al profesor.

• Usar mascarillas para casos indicados

2.2 MICROSCOPIA

El microscopio permite la observación de estructuras muy pequeñas que no pueden ser vistas a simple vista. El poder de resolución de un microscopio está en relación inversa a la longitud de onda de la luz usada.

2.2.1.- PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. Parte mecánica:

- Pie

- Columna (pilar, charnela y brazo)

- Tubo: Revólver

- Tornillo macrométrico o sistema de movimiento rápido

- Tornillo micrométrico o sistema de movimiento lento

- Platina: Pinzas sujetadoras de láminas y mandos coaxiales

- Subplatina: Pieza que asciende y desciende condensador, anillo porta filtros, diafragma iris y soporte para el espejo

2. Parte óptica del Microscopio:

- Oculares: lentes situados donde va del ojo del observador

- Objetivos: lentes situados en el lado de la muestra

Los objetivos traen impresas las siguientes características:

o Magnificación: Ej. x 25

o Apertura numérica (A.N.): Ej. 0,45

o Cualidades de la lente: Ej. Plan cuando se refiere a un objetivo Planacromático

o Longitud del tubo: Ej. 160 mm

o Corrección de espesor de laminilla Ej. 0,17 mm

o Aparato de iluminación. comprende: Espejo, Condensador, Diafragma

2.2.2.- USO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. El M.O. debe agarrarse siempre del brazo, nunca del tubo o platina porque deteriora el tornillo micrométrico.

2. Disponer el M.O. en una mesa horizontal y a una altura conveniente para observar sin fatiga Verificar que los oculares estén limpios y en posición correcta.

3. Cuando se observe preparaciones fijas, puede inclinar el tubo del M.O. para una mejor comodidad si se trata de Microscopios que no posean el sistema inclinado. Si se observan preparaciones frescas o”in vivo” debe mantenerse la platina horizontal.

4. Verificar que los objetivos en el revólver estén en orden progresivo de aumento.

5. Coloque el objetivo de menor aumento en el eje óptico girando el revólver hasta que haga “clik”.

6. Suba el condensador hasta que la lente superior este muy cerca de la platina y abra el diafragma totalmente.

7. Si el Microscopio tiene luz incorporada, encender el interruptor y si tiene espejo orientarlo hacia la ventana mejor iluminada o al fluorescente más cercano.

8. Observe por el ocular la iluminación del campo y trate de lograr la máxima luminosidad moviendo el espejo; luego, si es necesario baje ligeramente el condensador.

9. Colocar en la platina el preparado a estudiar, cuidando que la laminilla cubreobjetos quede hacia arriba, la etiqueta hacia la derecha del observador y que el preparado se encuentre entre el condensador y el objetivo; es decir, atravesado por los rayos de luz. Este desplazamiento se logra utilizando los mandos coaxiales.

10. Para iniciar la observación, emplee siempre el objetivo de menor aumento (panorámico ó 10X) y procure que la distancia objeto-objetivo sea la mínima (5 mm.), esto se logra bajando el tubo con el tomillo macrométrico y observando por un lado del Microscopio el descenso del mismo. Luego, observe por el ocular y simultáneamente suba al tubo con el tomillo macrométrico hasta enfocar el elemento en estudio, de inmediato utilice el tomillo micrométrico para dar nitidez a la imagen. Finalmente recorra la lámina con la ayuda de los mandos coaxiales para su observación integral, siempre utilizando el tomillo micrométrico para no perder la nitidez.

Cuando se trate de Microscopios en donde la platina asciende al utilizar el tomillo macrométrico, la distancia objeto-objetivo debe ser de 1 a 1,5 cm.

11. Regular el diafragma iris hasta obtener las mejores condiciones de contraste.

12. El elemento que desee observar a mas aumento coloque en el centro del campo y cambie de objetivo girando el sistema de revólver, teniendo cuidado de girar el objetivo del siguiente aumento (45X) y NO el de inmersión. Ponga nítida la imagen únicamente con el tomillo micrométrico.

Es importante tener en cuenta que para cambiar de un aumento a otro no debe manipularse con el tomillo macrométrico porque corre el riesgo de romper la lámina o la lente frontal del objetivo.

13. Para observar las estructuras con objetivo de inmersión, coloque el elemento seleccionado en el centro del campo y gire un poco el objetivo, de manera tal, que quede libre éste sector de lámina para que pueda colocarse una gota de aceite de inmersión. Luego, continúe girando el revólver hasta que el objetivo de inmersión (100X) contacte con la gota y encaje en el eje óptico; finalmente, observe por el ocular y aclare la imagen solamente con el tomillo micrométrico.

Una vez terminada la observación limpie el objetivo de inmersión y la lámina con el campo ligeramente humedecido con alcohol isopropílico o metanol.

2.2.3.- AUMENTOS DEL MICROSCOPIO Y CÁLCULO APROXIMADO DE DIMENSIONES CELULARES

1. Para calcular el aumento del Microscopio, multiplique el aumento del objetivo por el del ocular.

Ej.: Objetivo 40X y Ocular 10X

40 x 10 = 400 aumentos

2. Para el cálculo aproximado de dimensiones celulares, se debe conocer el diámetro del campo microscópico que varía de acuerdo al objetivo que se usa.

Diámetro del campo microscópico

Ocular Objetivo Diámetro del

campo en micras

10X 10X 1500

10X 45X 400

10X 100X 150

Ejemplo: Si observamos una célula epitelial al Microscopio con objetivo 10X y ocular 10X, y si ésta ocupa la tercera parte del campo microscópico, concluiremos que la célula mide aproximadamente 500 micras; es decir, la tercera parte de 1500.

2.2.4.- CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. El

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