MANUAL DE INMULOGIA

INMUNOLOGIA

Introducción

Inmunología es el estudio de las reacciones in vitro antígeno-anticuerpo. La inmunología diagnosticada o pruebas de serodiagnóstico para ayudar en el diagnostico de las enfermedades infecciosas, de los trastornos de la inmunidad, reacciones alérgicas, heoplastias (antígenos relacionados con tumores) y agrupamientos sanguíneos y su tipificación (inmuno-hematologia)

Objetivo

El objetivo de este manual es el de comprobar técnicas utilizadas en inmunología. El personal sabrá utilizar las diluciones pertinentes para cada determinación inmunológica.

 Generalidades

1. Las pruebas incluyen el estudio de las proteínas del suero con acción inmunológicas.

2. Las proteínas inmunológicamente activas se conocen como anticuerpos, inmunoglobulinas, inmunógenos y antígenos.

3. Se prueba el suero del paciente para saber si contiene anticuerpos contra algún antígeno en particular.

4. La metodología serológica se basa en un aumento en el titulo de un anticuerpo especifico, entre la fase aguda (en el inicio) de una enfermedad y la fase de convalecencia (2 a 4 semanas después)

5. Se identifica la formación de anticuerpo o auto anticuerpos contra un reto antígeno.

Reacción Antígeno Anticuerpo

La respuesta antígeno anticuerpo del organismo es el método de defensa natural contra los microorganismos invasores. En los trastornos de autoinmunidad, se presenta la producción de auto anticuerpos o de anticuerpos así mismo.

Conceptos de:

- Antígeno: Cualquier sustancia que estimula la formación de anticuerpos en

Organismos que reaccionan con el específicamente.

- Anticuerpo: Sustancia que generalmente aparece en el organismo como

Resultado de la introducción de un antígeno y el cual reacciona

Específicamente con ese antígeno.

REQUISITO PARA TOMA DE MUESTRA

ELEMENTO NECESARIO

Reacciones Febriles: Ayuno de 6 a 8 horas, no tomar antibióticos antes de la toma de muestra o 15 días después del tratamiento.

VDRL ó RPR Ayuno de 6 a 8 horas

Proteína C reactiva: Ayuno de 6 a 8 horas

Factor reumatoide: Ayuno de 6 a 8 horas

Prueba de embarazo En el caso de prueba en sangre deberá estar en ayuno de 6 horas, con un retraso menstrual mínimo de 35 días en consideración a la última fecha. Para una prueba en orina, requiere de 40 días después de la fecha de la ultima menstruación.

(en sangre y orina)

V.I.H Deberá tener un ayuno de 8 horas como mínimo.

Antiestreptolisina Deberá acudir el paciente con 8 horas de ayuno, de preferencia antes de un tratamiento con antibióticos o 15 días después del mismo.

Introducción

El anticuerpo estreptolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en títulos bajos, debido a que las infecciones estreptocoxicas son comunes. Sin embargo, in titulo alto o creciente de anti estreptosilina O, indica una infección reciente producida por un estreptococo B hemolítico del grupo A con amigdalitis, sepsis puerperal, erisipela.

 Fundamento

Los anticuerpos Antiestreptolisina O, se detecta un suero, pero su reacción con la AELO absorbida por el soporte inerte de látex. Los anticuerpos AELO reaccionan con la estreptolisina produciendo una aglutinación visible macroscópicamente.

Muestra: suero (se puede conservar solo 24 horas en refrigeración, de 2-10° Co. Congelados por periodos prolongados)

 Técnica

Llevar los reactivos y la muestra a temperatura ambiente. Agitar el Reactivo de Látex antes de usar, vaciando previamente la pipeta del gotero.

• Cualitativa: en uno de los sectores delimitados de la placa de vidrio adjunta al equipo colocar:

Reactivo de Látex 1 gota (50 ul)

Muestra 1 gota (50 ul)

Mezclar con palillo descartable (uno para cada muestra) hasta obtener una suspensión uniforme en la superficie delimitada de la placa. Inmediatamente disparar un cronometro, balancear suavemente la placa y observar macroscópicamente el resultado dentro de 2 minutos.

 Interpretación

Negativo: Suspensión Homogéneo

Positivo: Aglutinación que aparece dentro de los 2 minutos se califica de 1 a 4 (+)

Valores de referencia.

Hasta 200 ui/ml

Nota: se recomienda efectuar determinaciones seriadas cada 15-20 días durante 4 a 6 semanas.

Introducción

La proteína C Reactiva (PCR) es una proteína termolábil que no atraviesa la barrera placentaria y cuya movilidad electroforética se encuentra entre las zonas de q y b globulinas. Su nombre se debe a la capacidad para precipitar los polisacáridos C de los neumococos.

Se incrementa en suero en enfermedades inflamatorias o como respuesta a necrosis tisular.

Su determinación es importante debido a que aumenta al comienzo de la enfermedad 14 a 26 horas luego de la inflamación o injuria tisular; y desaparece en la etapa de recuperación, apareciendo solo durante la fase activa del proceso inflamatorio.

La PCR se encuentra comúnmente aumentada en artritis reumatoide activa, infecciones virales, tuberculosis, fiebre reumática activa, infarto agudo de miocardio. La determinación de PCR no solo indica la intensidad de la enfermedad, sino también la respuesta del paciente a un dado tratamiento.

 Fundamento

La PCR se detecta en suero por reacción con un anticuerpo específico absorbido sobre soporte inerte de látex.

La PCR se une a los anticuerpos absorbidos, produciendo la aglutinación de las partículas de látex, visible microscópicamente.

Muestra: Suero: debe ser preferentemente fresco. En caso de no procesarse en el momento, se puede conservar hasta 24 horas en refrigeración entre 2-10° y hasta 4 semanas congelado a -20°C.

 Técnica

Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. Agitar el Reactivo de Látex antes de usar, vaciando previamente la pipeta del gotero.

Preparar muestra diluida 1:20 mezclando 1 gota (50 ul) de suero con 1 ml de Buffer.

En uno de los círculos de la placa de vidrio adjunta al equipo colocar:

Reactivo de Látex 1 gota (50 ul)

Muestra diluida 1 gota (50 ul)

Mezclar con palillo descartable hasta obtener una suspensión uniforme en la superficie del círculo. Inmediatamente disparar un cronómetro, balancear suavemente la placa y observar macroscópicamente el resultado dentro de 3 minutos.

Para una correcta visualización de los resultados, debe mantenerse la placa sobre un fondo negro y ligeramente por encima de un haz luminoso horizontal.

 Interpretación

Negativo: suspensión homogénea

Positivo: Aglutinación que aparece dentro de los 3 minutos. Se califica de 1 a 4 (+)

Valores de referencia

Hasta 6mg/1.

 Introducción

La artritis reumatoide es un síndrome de etiología desconocida, caracterizado por una inflamación inespecífica y generalmente simétrica de las articulaciones, que a veces evoluciona hacia la destrucción de las estructuras articulares y peri articulares. Los FR son generalmente de tipo IgM. También se han encontrado FR de tipo IgG.

Los FR de tipo IgM están presentes en el 85-90% de los adultos con artritis reumatoide, aunque no es específico de la enfermedad puesto que también se han encontrado en individuos sanos (en un 3 a 5% de los casos).

Por tal motivo, es aconsejable realizar la precipitación de loas globulinas con sulfato de amonio, para mantener en solución cualquier aglutina responsable de una falsa reacción positiva o algún posible inhibidor.

 Fundamento

El factor reumatoide de tipo IgM, se detecta en presencia de gamma inmunoglobulina o fracción II de Cohn (que en este caso es el antígeno) absorbida sobre un soporte inerte de látex-poliestireno. Este antígeno se une a los FR (anti IgM) produciendo una aglutinación de las partículas de latex-poliestireno, visible microscópicamente.

Muestra: Suero (se puede conservar por 8 días en refrigeración de 2 a 8°C).

 Técnica

a) Preparar Muestra diluida 1/20 mezclando 1 gota (50 ul) de suero con ¡ ml de Buffer de Glicina.

b) En uno de los círculos de placa de vidrio adjunta al equipo, colocar:

Muestra diluida 1 gota (ul)

Antígeno de Látex-Globulina 1 gota de (50 ul)

Mezclar con palillo o varilla de vidrio hasta obtener una suspensión uniforme en toda la superficie del círculo.

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