EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES

PRÁCTICA 4

EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES

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OBJETIVO

El propósito de este trabajo es el de extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos mediante una técnica compleja de cromatografía.

INTRODUCCIÓN

La fotosíntesis (proceso que permite a los vegetales a adquirir la materia y la energía que necesitan para desarrollar sus funciones vitales) se lleva a cabo por el aspecto en las hojas y en los tallos jóvenes de pigmentos, capaces de captar la energía lumínica.

Entre los distintos métodos que existen para separar y adquirir esos pigmentos se encuentra el de la cromatografía; una técnica que accede a la separación de las sustancias de una mezcla, teniendo una afinidad diferente por el disolvente en el que se encuentran; al introducir una tira de papel en esa mezcla, el disolvente arrastra con distinta velocidad a los pigmentos según la solubilidad que tengan y los separa, permitiendo identificarlos perfectamente según su color.

Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes tonalidades: clorofila A (verde intenso), clorofila B (verde claro), caroteno (naranja) y xantofila (amarillo).

MATERIAL

- Mortero completo - Alcohol 96º

- Gradilla - Agua destilada

- Tubos de ensayo - Benceno o tolueno (o gasolina)

- Tubos de recogida - Papel de filtro

- Embudo de cristal - Hojas verdes (geranio, espinaca...)

TÉCNICA DE PREPARACIÓN

1. Picar trozos pequeños de hojas limpias en el mortero (triturar sin golpear).

2. Añadir poco a poco alcohol y machacar hasta alcanzar un extracto de color verde más o menos intenso, con una cantidad casi a llenar el mortero.

3. Preparar un tubo de ensayo con un embudo dentro y poner sobre la gradilla.

4. Colocar dentro del embudo un trozo cuadrado de papel de filtro ajustándolo al embudo (doblándolo cuanto sea necesario)

5. Verter el extracto de alcohol sobre el embudo para filtrar y eliminar los restos de hojas. Llenar ¼ o más del tubo. Si es mucha cantidad verter en otro tubo y dejar filtrando para guardar extracto sobrante.

6. Derramar tolueno en otro tubo midiendo más o menos ¼ de tubo o menos.

7. Verter ahora el tolueno, despacito y resbalando la pared, en el tubo con extracto de alcohol (no llenarlo porque aún hay que añadir producto).

8. Preparar un trozo de papel de secar para tapar el tubo con tu dedo gordo.

9. Voltear varias veces el tubo disolviendo ambos productos (no agitar) hasta conseguir una mezcla homogénea.

10. Añadir ¼ de tubo de agua destilada, resbalando la pared de tubo y observar.

11. Si no se obtiene una separación, girar despacio nuevamente el tubo.

12. Analizar lo observado y explicar el resultado.

12. Percibir el papel filtrado e interpretarlo.

ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

El resultado de esta práctica es obtener dos bandas de pigmentos en el tubo de ensayo. Una verde (arriba) y una amarilla (debajo) por la diferente solubilidad de los pigmentos en los productos, y la diferente solubilidad y densidad de los tres productos.

o En el tubo de ensayo, con las sustancias ya mezcladas y reposadas en la

gradilla durante unos minutos, se contemplará una separación de colores. Empezando desde arriba, nos encontraremos con la clorofila y el tolueno de color verde. En segundo lugar, en medio, la xantofila y el alcohol con un aspecto amarillento. Y por último, en la base del tubo, hallaremos el agua emulsionada de color blanco.

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