ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL PARQUE “ BICENTENARIO” MEDIANTE MÉTODOS RÁPIDOS DE ANÁLISIS

RESUMEN

El presente trabajo trata sobre la utilización e importancia que tienen los métodos rápidos de análisis microbiológico en ensayos y prácticas de laboratorio. Estos métodos de análisis microbiológico fueron usados para el aislamiento, identificación y enumeración de microorganismos presentes en el parque  “Bicentenario” en Quito para este análisis se tomaron algunas muestras de agua, suelo aire y superficies como bancas monumentos árboles etc. El método utilizado para la toma de muestras de superficies planas fue el hisopo Quick Swab. Este instrumento presentó facilidad en el manejo, transporte y metodología de uso. Una vez obtenida la muestra, se procedió a sembrar en las diferentes placas Petrifilm, los cuales contienen nutrientes de Agar, un agente gelificante soluble en agua fría y un tinte que facilita el recuento de las colonias, lo cual es importante para el conteo total de la población existente en las diferentes placas. Al cumplirse el tiempo de incubación de 24 horas se inició el recuento de los diferentes microorganismos a analizar, teniendo en cuenta las especificaciones de los manuales de recuento de las placas Petrifilm. Al ser la finalidad realizar un análisis microbiológico se registró el número total de cada microorganismo, de acuerdo a esto se conoció la carga bacteriana, que reside en algunas superficies en el parque.

PALABRAS CLAVE

 Inocular, Placa petrifilm, hisopo Quick Swab, agente gelificante

ABSTRACT

This paper discusses the use and importance of rapid methods of microbiological analysis and laboratory tests. These methods of microbiological analysis were used for the isolation, identification and enumeration of microorganisms in the "Bicentennial" park in Quito for this analysis some water samples were taken, air and soil surfaces as monuments benches trees etc. The method used for sampling the swab was flat surfaces Quick Swab. This instrument introduced ease in handling, transport and use methodology. Once the sample, we proceeded to plant in different Petrifilm plates, which contain nutrients Agar, a soluble gelling agent in cold water and a dye that facilitates counting colonies, which is important for total count the existing population in the different plates. When the time 24 hours incubation count analyzing different microorganisms started, considering specifications manuals count Petrifilm plates. As the purpose microbiological analysis the total number of each microorganism, accordingly bacterial load, which resides on some surfaces in the park was known was recorded.

INTRODUCCIÓN

La Microbiología, el estudio de los organismos microscópicos, deriva de 3 palabras griegas: mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencia) que conjuntamente significan el estudio de la vida microscópica (Villa, 2012).

Estos métodos son derivados de las diferentes ramas de la microbiología como la  clínica, ambiental y alimentos, es un estudio detallado de una muestra en este caso de suelo, aire y agua el cual permite identificar los microorganismos presentes en la misma, este grupo incluye las bacterias, hongos (levaduras y hongos filamentosos), virus, protozoos y algas microscópicas. Para el estudio se utilizaron métodos rápidos de análisis (Villa, 2012).

El término de “método rápido” en microbiología engloba una amplia variedad de procedimientos y técnicas que permiten obtener resultados en menos tiempo que las pruebas diagnósticas convencionales. Existen métodos rápidos aplicables a la microscopía, técnicas de identificación bioquímicas, pruebas de detección de antígenos y de anticuerpos (Canelo, 2010).

Los principales requisitos que deben cumplir los métodos rápidos de análisis microbiológicos son:

• Exactitud en la obtención de resultados de acuerdo a requerimientos establecidos: sensibilidad, versatilidad, aplicación potencial y comparación con métodos de referencia.
• Rapidez: tiempo mínimo requerido para la obtención de resultados, número de muestras procesadas en cada ensayo, por hora y por día.
• Aceptabilidad: por parte de la comunidad científica.
• Sencillez de manejo: en la preparación de la muestra, equipo y análisis.
• Reactivos: facilidad de preparación, estabilidad, disponibilidad.
• Fiabilidad del método: avalada por la compañía responsable de la técnica analítica.
• Mínimo espacio útil requerido.

La mayoría de estos métodos rápidos cumplen con las siguientes características:

• Listos para utilizarse.
• Sin preparación alguna anterior.
• Sin tiempo perdido.
• Sin errores por cansancio.
• Su reproductibilidad es mucho más precisa y exacta.

Los métodos rápidos y automatizados en microbiología se expanden continuamente. Esto debido a la rapidez con la que se obtienen los resultados, que es esencial para reducir costos y tiempo de espera en procesos de producción en la industria alimentaria o en la aplicación de medidas correctivas en microbiología ambiental (Canelo, 2010).

Microbiología del aire

Actualmente, existen una gran cantidad de métodos e instrumentos para detectar los microbios del aire, las técnicas utilizadas son diversas, de las cuales, la sedimentación, filtración, el impacto sobre distintas superficies sólidas son las más utilizadas y rápidas.

Microbiología del suelo

Los microorganismos del suelo se pueden clasificar en dos grupos según su preferencia por la concentración de sustratos que precisan. Pueden ser microorganismos zimógenos, si se encuentran en los niveles con mayor concentración de nutrientes, y responden a la adición de sustratos fácilmente utilizables, o microorganismos autóctonos, si son propios de la zona y que tienden a utilizar materia orgánica nativa en gran cantidad.

Microbiología del agua

Dependiendo del tipo de ambiente acuático que se vaya a estudiar se encuentran diversos tipos de microorganismos. Se debe recolectar de 100 a 1000 ml de muestra de agua para realizar el análisis.

OBJETIVO

El objetivo de la investigación fue aplicar los conocimientos adquiridos de la microbiología ambiental en la detección de microorganismos presentes en el aire, agua y suelo del parque “Bicentenario” mediante el uso de métodos rápidos de análisis microbiológicos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Toma de muestras

Parque Bicentenario

Se recolectaron muestras de una laguna, de la tierra y aire alrededor de la misma, en frascos estériles y en placas Petri para el muestreo del aire. Para las muestras de superficies se realizó con la ayuda del Hisopo Quick Swab que consistía en el siguiente procedimiento:

Se dobló la válvula roja hasta que se     rompa para que se transfiera  todo el caldo al tubo, posteriormente se retiró el hisopo del tubo y se repasó con el  por el interior de un marco de 50 cm2, esto se realizó en dos diferentes superficies, en una banca y un monumento posteriormente se  volvió a colocar el  hisopo en el caldo y se lo llevo  al laboratorio manteniendo el hisopo recto para evitar que se riegue el caldo, ya en el laboratorio se agitó el tubo vigorosamente con la mano durante 10 segundos para que las bacterias se liberen del hisopo.

La recolección se realizó en horas de la tarde y mismo día  se trasladó  al laboratorio para incubar las placas Petri y realizar las diluciones.

Análisis de agua

Se tomó 10 mL de la muestra para realizar las diluciones  10-1 y 10-2, posteriormente se inoculó en los Petrifilm (EC) y (EB) con las correspondientes diluciones (dos Petrifilm para una dilución) y se incubaron por 24h/37°C. Concluido este tiempo se realizó los recuentos.

Análisis de suelo

Se tomó 10 g de muestra de suelo y se colocó en un frasco con 90mL de agua destilada posteriormente se realizaron 4 diluciones sucesivas y se inocularon en las placas  Petrifilm (EB) y (EC), (dos Petrifilm para cada dilución). Se incubaron por 24h/37°C y se realizó el recuentro de coliformes fecales  y E coli.

Análisis de aire

Se expusieron las placas con agar saboraud y nutritivo al aire en el parque Bicentenario por 30 minutos se taparon e incubaron las muestras para mohos y levaduras, con agar saboraud, de 3 a 5 días/25°C. Para bacterias, con agar nutritivo, de 24 a 48 horas/37°C, esto depende del crecimiento obtenido. Concluido este tiempo se realizaron los recuentos.

Análisis de superficies

Se procedió a realizar diluciones 10-1  de los cuatro Quick Swab con el  caldo contenido.

Inmediatamente se inoculó en cada Petrifilm (YM) y (AC) con 1 mL de la dilución hecha. Posteriormente se llevó a incubar cada placa Petrifilm a sus temperaturas correspondientes: mohos y levaduras de 3 a 5 días/ 25°C y aerobios mesófilos a 48 horas/ 37°C

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