Adn De Tejido Vegetal

Universidad Autónoma de Chiriquí

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas

Escuela de Química

Extracción de ADN de tejido Vegetal

Por.

María Pineda

Marin Morales

Profesora:

Albertina Montenegro

Bioquímica 2

David 2014

Extracción de ADN de tejido Vegetal (cebolla)

Objetivos:

 Realizar la extracción de ADN en el tejido vegetal de la cebolla.

 Poner en práctica principios básicos de extracción de ADN de un tejido

 Analizar las funciones de cada reactivo durante la extracción.

Marco teórico:

Los agregados vegetales como polisacáridos, fenoles y compuestos secundarios son el principal problema encontrado en la extracción y purificación del ADN vegetal, estos pueden deteriorar el ADN e inhibir la acción de la enzima Taq polimerasa. Las hojas de diversas especies de plantas poseen niveles variados de alcaloides, esteroides, flavonoides, glucósidos cianogénicos, gomas, taninos, resinas y algunos ácidos que pueden comprometer la extracción del ADN. (Martínez C, 2008).

La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN. (Remota, P. A, 2013).

En la extracción de los ácidos nucleicos, existen diferentes métodos que permiten su obtención partiendo de diferentes fuentes por ejemplo; plantas plásmidos, gotas de sangre, células bacterianas o eucariotas. El método de extracción para la purificación de ADN depende de la aplicación del anterior. (Santaella T, 2012).

Materiales y Reactivos:

Materiales:

Licuadora Oster, Goteros, vasos químicos marca Kimax de 100ml, espátulas, Balanza analítica KERN 573 (max 650g, min 0.5g) probetas, policial, centrifugadora Orto ALRESa Mod Digicen

Reactivos:

EDTA: La principal toxicidad del EDTA es en el riñón. Las dosis repetidas pueden causar anomalías en el túbulo contorneado distal.

SDS: Toxico en contacto con la piel, nocivo en caso de ingestión, provoca irritación ocular grave.

Cloroformo: Carcinógeno humano.

Perclorato de sodio 5M: Su inhalación causa tos, dolor de garganta y enrojecimiento de los ojos.

Etanol 95% y 70%: presenta irritación en los ojos, puede producir dermatitis en la piel. Por medio de inhalación causa nauseas, dolor de cabeza, y vómitos.

Citrato de sodio: si se inhala causa irritación en la mucosa. En contacto con la piel causa irritación. En contacto con los ojos causa irritación.

Cloruro de sodio: irritación ocular.

Procedimiento:

• Pesamos 5 gramos de cebolla y le adicionamos 15ml de amortiguador, licuamos por 3 minutos y le adicionamos 2 ml de SDS a 60ºC por 30min.

• Centrifugamos a 3000 revoluciones.

• Le agregamos al sobrenadante igual volumen de cloroformo/alcohol /isoamílico (24:1) y agitamos por 30min.

• A la fase acuosa le agregamos el doble de alcohol.

• Precipita el ADN, lavamos 2 veces con etanol al 70%.

• Disolvimos el ADN en 4 ml de amortiguador.

Resultados:

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