Analisis Microbiologicos De Alimentos

Objetivos del ejercicio

Se trata de determ inar si una m uestra problem a contiene un determ inado gen con secuencia de nucleótidos conocida

utilizando la reacción de la PCR para diagnosticar la presencia de un m icroorganism o (en este supuesto práctico,

Cryptosporidium parvum) en una m uestra de un alim entos. Se utiliza la reacción de la PCR para am plificar (obtener m illones

de copias) el segm ento de ADN con secuencia conocida utilizando dos cebadores o 'prim ers' específicos (uno para el

com ienzo y otro para el final de la región a am plificar). Si los cebadores específicos se hibridan con el ADN problem a hay

am plificación y el tam año del segm ento am plificado coincide con el tam año de la secuencia conocida, con lo que se

diagnostica la presencia del gen o m icroorganism o. Si no hay am plificación o el segm ento am plificado tiene otro tam año no

existe en la m uestra el segm ento de ADN buscado y se descarta la presencia del gen o m icroorganism o.

El objetivo de este ejercicio es fam iliarizarse con la interpretación de los resultados de esta reacción, la m ás utilizada en el

diagnóstico m olecular debido a la posibilidad de obtener los m illones de copias que se deseen y por lo tanto ser la m ás

sensible.

Tam bién se trata de com prender com o la PCR se utiliza para am plificar el ADN y generar los fragm entos de ADN de tam año

definido, visualizando lo que sucede a nivel m olecular en el tubo donde se lleva a cabo la reacción. Este últim o objetivo se

consigue m ejor con el ejercicio realizado en la m odalidad de dificultad alta en la que se utilizan los sim uladores.

Nivel de Dificultad

Puede efectuar este ejercicio con cualquiera de los dos niveles de dificultad:

1. A lto. Utilizando un sim ulador en el que Vd tiene que m anejar la pipeta autom ática y añadir los correspondientes

reactivos a los respectivos tubos y otro sim ulador para que Vd efectúe la electroforesis en gel de secuenciación. Para

elegir esta opción haga clic aquí en esta frase y continúe en esa página web. Se requiere utilizar una resolución de

pantalla de 800*600 y de 48 Mb de Ram

2. Normal. Sin m anejar los sim uladores de laboratorio virtual interpretando únicam ente los resultados. Si prefiere esta

opción continúe sobre esta página web.

La importancia del Cryptosporidium parvum y su detección en los alimentos

Cryptosporidium parvum es un protozoo, parásito obligado, que infecta a un am plio núm ero de hospedadores incluido el

hom bre. Sus quistes son elim inados en las heces del hospedador y se m antienen infectivos en el suelo y en el agua

durante largos períodos de tiem po.

La transm isión fecal-oral (de persona a persona) es frecuente, especialm ente en los niños, y tam bién la transm isión de un

anim al a una persona. Aunque lo m ás habitual en la transm isión a través de agua.

Los terneros, los pollos, los corderos, los lechones y los ratones son anim ales, todos ellos, que han sido identificados com o

portadores de Cryptosporidium spp., y que a veces desarrollan enteritidis. Por consiguiente en los sistem as intensivos de cría

anim al existe la posibilidad de que se establezca la infección en los anim ales y de que se contam inen las superficies del

equipo y utensilios en los m ataderos. Se considera que la dosis infectiva en hum anos está com prendida entre 1 y 100

ooquistes.

La reacción de la PCR

Pocos descubrim ientos del com plejo m undo científico actual pueden ser considerados realm ente com o revolucionarios. Uno

de estos se díó a m ediados de los 70' y produjo un gran núm ero

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