BANDEO CROMOSOMICO - OBJETIVOS:

                OBJETIVOS:

1.- Conocer la importancia de los métodos de bandeo cromosómico.

2.- Diferenciar los tipos de bandeo cromosómico.

3.- Describir las técnicas para el uso de los métodos de bandeo.

INTRODUCCIÓN

La genética estudia los cromosomas en relación con la herencia. En 1965 se descubre que el numero de cromosomas humanos 2n=46. Lo hacen Levan y Tijo, mediante un choque hipotónico (estimulo para que la celula se hinche y se visualicen mejor los cromosomas).

Anteriormente se creía que los humanos tenían 2n=46, ya que se observaban solo 22 bivalentes puesto que el par X-Y no forma bien esta estructura. Sin embargo, con la técnica del choque hipotónico se pudieron visualizar correctamente todos los cromosomas.

Los cromosomas visibles al microscopio solo son en periodo de división celular, sobre todo en metafase donde alcanzan su mayor grado de condensación. El tejido con mas actividad mitótica es la medula osea. Cuando se hace un cariotipo se usan linfocitos, los cuales normalmente no se dividen.

En este trabajo hablaremos de los métodos de bandeo que se usan para teñir los cromosomas e identificarlos.

Bandeo Cromosómico:

Técnica utilizada para diferenciar pares cromosómicos individuales, generalmente imposibles de distinguir morfológicamente, y que consistente en usar tinciones diferenciales a lo largo de cada cromosoma, de tal manera que se induce la aparición de zonas heterocromáticas con una distribución característica en forma de bandas. Según la técnica empleada se denominan bandas Q, bandas G, bandas C, bandas R o bandas T.  Hay diversos tipos de bandeo

Tipos de bandeos:

Los bandeos morfológicos: se obtienen basándose en técnicas inherentes a la heterogeneidad de la cromatina. Existe en ellos una relación con proteínas (histónicas y no histónicas) e interacciones ADN.

Estos bandeos pueden ser a su vez clasificados en: técnicas de tinción diferencial, métodos de tinción selectiva, coloraciones con fluorocromos específicos aislados o combinados con colorantes no fluorescentes, y tinciones con anticuerpos fluorescentes.

Los bandeos dinámicos: se obtienen basándose en: técnicas que implican la incorporación de una base análoga, bromo-desoxiuridina (BrdU), en el ADN durante la fase S del ciclo celular. Se denomina también bandeo de replicación debido a la relación existente entre el tiempo de incorporación del BrdU y el patrón de replicación.

Cuando se incorpora BrdU durante la fase de replicación temprana se obtiene un patrón de bandeo R destacándose las regiones ricas en G-C. Luego de realizada esta técnica, los cromosomas pueden visualizarse utilizando distintos métodos de tinción que emplean colorante tales como el Giemsa o el naranja de acridina o utilizando anticuerpos específicos.

TIPOS DE BANDEO CROMOSOMICO

BANDEO C

Es el método convencional para analizar las bandas heterocromáticas en cromosomas de plantas y de animales, tanto vertebrados como invertebrados.

Muestra heterocromatina constitutiva sobre todo en los centrómeros. Se hace mediante un tratamiento alcalino drástico

Es  frecuente el polimorfismo para bandas C, tanto entre individuos de la misma especie como entre el par de cromosomas homólogos de un individuo ( heterocigosis para el patrón de bandeo). Las bandas C corresponden a regiones cromosómicas aparentemente deprovistas de genes.

[pic 1]

BANDEO CROMOSOMICO G

Los cromosomas son sometidos a digestión con la enzima tripsina de manera controlada. Los cromosomas se desnaturalizan mediante calor en solución salina (esto desnaturalizará ADN con abundantes AT) y, a continuación,se tiñen con Giemsa que es un colorante químico que enlaza ADN. Las bandas oscuras de tinción positiva, son las bandas G. Las pálidas son G negativas, se denominan bandas R. Las regiones oscuras son las que se replican más tarde en la fase S y contienen contienen cromatina más condensada. Las bandas R suelen replicarse temprano en la fase S y tienen menos condensada la cromatina. Los genes se concentran sobre todo en esta banda, mientras que el ADN de las bandas G es menos activo transcripcionalmente. Las bandas R son Q negativas.

Procedimiento: Está tinción es muy rápida y sencilla. Primero de todo se necesitan células en metafase para poder observar el bandeo G, a estas células se las somete a una digestión (desnaturalización) controlada de proteínas con tripsina. Los cromosomas se desnaturalizan mediante calor en solución salina (esto desnaturalizará ADN con abundantes AT) y, a continuación, se tiñen con Giemsa que es un colorante químico que enlaza ADN. Las bandas oscuras de tinción positiva, son las bandas G

[pic 2]

En estos cromosomas humanos (8 a 11) se puede ver como al teñir durante la profase temprana las bandas G se van subdividiendo.

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