Banco De Sangre

Objetivo de la práctica

Establecer y describir las técnicas de laboratorio para realizar control de calidad de células y antisueros.

Preguntas problemas

• ¿Cuáles son las técnicas de laboratorio para realizar control de calidad de células y antisueros?

• ¿Cómo se realizan las técnicas de laboratorio para realizar control de calidad de células y antisueros?

• ¿Que nos indica cada una de las técnicas de laboratorio para realiza?

Marco teórico

Las células a las que se hace referencias aquí son los glóbulos rojos, los cuales se obtuvieron al mezclar una pequeña cantidad de sangre con solución salina al 0,85% (isotónica) en un tubo de ensayo, centrifugar por 45 segundos en la Serofuge, descartar el sobrenadante y se repite el mismo procedimiento dos veces, pero se centrifugan por 45 segundos y 1 minuto respectivamente, posteriormente se descarta el sobrenadante, se depositan las células del fondo en otro tubo, y se le adiciona solución salina al 0,85%, hasta alcanzar un tono de color rojo sandia. Dicho proceso de lavado removió todos los componentes de la sangre diferentes a los glóbulos rojos. Y los antisueros son suero sanguíneo que contiene anticuerpos.

En inmunohematológia la reacción antígeno-anticuerpo es de vital importancia para la clasificación de grupos sanguíneos, el diagnostico de ciertas enfermedades, entre otras, debido a su gran especificidad y sensibilidad.

Los antisueros están sujetos a variaciones biológicas, debido a que pueden ser de origen humano, animal o vegetal. Por ende es de gran importancia que se le dé un buen cuidado y uso a los antisueros, someterlo a las técnicas de control de calidad, un óptimo almacenamiento.

Los antisueros vienen de su casa comercial con unas indicaciones las cuales deben ser seguidas sin variaciones. Esto incluye fecha de caducidad, que por lo general es de un año. A cada antisuero se le deberá comprobar su especificidad y título.

A las células se les debe comprobar su especificidad, determinado a presencia de los antígenos de la superficie de los glóbulos rojos al reaccionar con antisueros específicos.

La especificidad de las células se comprueba de depositando en tubos de ensayo limpios y secos, 1 gota de las células problema por cada 2 gotas de antisueros de especificidad conocida que haya sido tratado bajo sus condiciones óptimas de almacenamiento y uso, posteriormente se centrifuga en la Serofuge por 15 segundos, y le leerá los tubos por número de cruces, los anticuerpos se unirán a los eritrocitos que tengan el antígeno con el que compartan sus características conformacionales y las mismas proteínas, en esta reacción antígeno-anticuerpo se distinguen dos fases, la primera consiste en la unión del antígeno con el anticuerpo y la segunda en las manifestaciones que resultan de dicha unión, la aglutinación. La especificidad de los antisueros se comprueba de forma similar, pero en estos se agregar en todos los tubos de ensayos limpios y secos, 2 gotas del antisuero problema que haya sido tratado bajo sus condiciones óptimas de almacenamiento y uso, y una gota de células reactivas (son las células suspendidas pero su especificidad ya es conocida), posteriormente se centrifuga en la Serofuge por 15 segundos, y le leerá los tubos por número de cruces, los anticuerpos del antisuero solo se unirán a los eritrocitos que tengan el antígeno con el que compartan sus características conformacionales y las mismas proteínas, en esta reacción antígeno-anticuerpo se distinguen las mismas fases ya mencionadas.

En resumen en la especificidad de las células, se buscara determinar que antígenos tiene estas en su superficie, y en la especificidad de los antisueros se buscara comprobar contra que antígenos de la superficie eritrocitaria reaccionan, que va determinado por los anticuerpos contenidos en este.

En la titulación de los antisueros, se mide la potencia del anticuerpo en el reactivo, y va determinada por la avidez, que es la velocidad con la que el anticuerpo aglutina cuando se une a un antígeno. En esta técnica se realizan unas diluciones seriadas de 1/2 a 1/512, utilizando un volumen de antisuero y el diluyente adecuado al tipo de anticuerpo contenido en el antisuero, si es tipo inmunoglobulina G se utiliza albumina, debido a que como solo posee dos sitios de unión necesita de otra sustancias que les ayude a potencializar su interacción con el antígeno, y si es de tipo inmunoglobulina M se utiliza solución salina, ya que al poseer diez sitios de unión al antígeno no necesita de un ayudante para su interacción con el antígeno. La temperatura también se debe tener encuentra durante la realización de la técnica, ya que los antisueros que tengan anticuerpos de tipo inmunoglobulina G, son óptimamente activos a temperatura de 37°C (anticuerpos calientes) y los tipo inmunoglobulina M a temperaturas inferiores a la temperatura ambiente (anticuerpos fríos). Posteriormente se les agrega una gota de las células reactivas, en caso de trabajar con anticuerpos tipo inmunoglobulinas G, se deberán incubar, y se esperan 30 minutos para después centrifugar por 15 segundos en la Serofuge y leer por número de cruces desde el tubo con mayor dilución (1/512) hasta el de menor dilución (1/2), el titulo será aquella dilución en donde primero haya dado dos cruces (2+).

La titulación de los antisueros se hace con el fin de determinar su potencia al reaccionar con el antígeno, estos tiene unos valores de referencia, si se está por debajo de estos valores, es indicio de que los anticuerpos han perdido potencia, que podría ser por su constante uso, por acercarse a su fecha de vencimiento, malas condiciones de uso y almacenamiento, si está por encima de estos valores de referencia nos indica que el anticuerpo tiene mucha potencia y que se encuentra en óptimas condiciones de uso.

Taller control de calidad de células y antisuero

1. Con sus palabras mencione: ¿Para qué es importante el control de calidad de las células y los antisueros?

Es importante porque nos permite corroborar si los antisueros cumplen con las especificaciones (especificidad y potencia) necesarias para su aceptación y uso, para poder realizar los procedimientos de laboratorio y poder emitir así resultados exactos y confiables. Con respecto a las células, se comprueba su especificada, lo que permite su uso adecuado.

2. ¿Qué pasaría si se realiza un mal control de calidad de los antisueros? Mencione 3 ejemplos.

No se comprobaría con exactitud la especificidad y potencia de los reactivos, que daría cabida a errores y malinterpretaciones de las reacciones antígeno-anticuerpo que se realicen con dicho antisuero, lo que llevaría a emitir resultados erróneos.

• Falsos positivos

• Erróneo título de antisuero

• Hemolisis

3. Mencione al menos seis antisueros y con qué células realizarían una reacción?

Antisuero A1 Células con antígenos A1

Antisuero A2 Células con antígenos A2

Antisuero B Células con antígenos B

Antisuero AB Células con antígenos A, B y AB

Antisuero D Células con antígeno D

Antisuero E Células con antígeno E

4. Esquematice como se daría la reacción de especificidad de todas las células sanguíneas?

5. Resuelva el siguiente cuadro:

Grupo sanguíneo

Ag

Ac

Reacción de especificidad

A A B Anti A

B B A Anti B

AB A y B - Anti AB

0 H A y B Anti H

6. ¿A qué se refiere el capítulo VII del decreto 1571 de 1993?

Nos dice que todos los bancos de sangre de Colombia, deben contar con un programa interno de garantía de calidad, que deberá ceñirse al Manual de Normas Técnicas y Procedimientos para Bancos de Sangre que expida el Ministerio de Salud, para asegurar la efectividad de los procedimientos, reactivos, equipos y elementos con el fin de obtener productos procesados de la mejor calidad.

Taller titulación de antisuero

1. ¿Qué es especificidad?

Propiedad por la cual un antígeno específico produce una reacción fuerte de aglutinación junto a un anticuerpo especifico, debido a que comparten las mismas proteínas y características conformacionales.

2. ¿Qué es una dilución seriada?

Es la reducción progresiva, paso a paso, de la concentración de una sustancia en disolución.

3. ¿Que se busca al titular un antisuero?

Medir la potencia del antisuero, que corresponde a la mayor dilución en la cual se da la reacción de aglutinación entre el antisuero su antígeno específico.

4. ¿Por qué es importante titular los antisueros?

Porque muchos de los antisueros a medida que se aproximan a su fecha de caducidad van disminuyendo su potencia, al igual aquellos que no hayan sido conservados en la condiciones óptimas o que haya expirado su vigencia.

5. Se requiere una dilución seriada para titular antisuero anti a, b, c y d. ¿Qué diluciones usaría para cada uno de los casos? ¿Qué disolvente usaría para cada caso y porque?

Para titular antisueros A, B y AB utilizamos diluciones que van desde ½ hasta 1/512, para antisuero anti D utilizamos diluciones de ½ hasta 1/1028.

Para diluir antisuero A, B y AB utilizamos solución salina, y para antisueros D utilizamos albumina ya que estos están compuesta de IgG, estas IgG tienen menos puntos de unión lo cual va a causar una reacción lenta, sirviendo entonces la albumina como un potencializador de la reacción antígeno-anticuerpo mediada por IgG.

6. ¿Que son anticuerpos fríos y anticuerpos calientes? ¿Por qué se les llaman así? De ejemplo.

Los anticuerpos fríos son de clase IgM, puesto que son óptimamente activos solamente por debajo de 10ºC, y los anticuerpos calientes son aquellos de clase IgG, que son óptimamente activos a la temperatura del organismo (37º C).

7. Se tienen dos reacciones:

Celulas con antígenos A, a la que se le agrego antisuero a

Celulas Rh+, a la que se les agrego antisuero d

¿En qué caso la reacción es más rápido y porque? ¿En cuál caso es lenta y por qué?

La primera reacción es más rápida que la segunda, porque los antisueros A es de tipo de IgM y la segunda de IgG. Las IgM tienes más puntos de unión permitiéndole unirse con mayor número de antígenos, que las IgG que solo tienen dos puntos de unión.

8. La bacterióloga del laboratorio de la Universidad San buenaventura necesita realizarle control de calidad a los reactivos utilizados en la asignatura de banco de sangre. Como esta de afán, al momento de realizar la suspensión de las células no se da cuenta que toma algunos coágulos, ¿Cómo cree usted que dará la prueba? ¿Emitiría ese resultado? Si o no ¿Por qué?

Lo más probable es que se den reacciones de falso positivo, ya que se presentara aglutinaciones en tanto en los tubos que tienen antisuero y células con antígenos específicos, como en los que no se halla especificidad, debido a que los coágulos harán parecer que hay aglutinación. No se emiten los resultados, porque la prueba presenta errores productos de la presencia de coágulos que hacen parecer que hay aglutinación.

9. Se solicitaran reactivos antisueros A y B nuevos en el laboratorio de la Universidad San Buenaventura, los cuales vienen en camino desde Barranquilla, cuando vienen por el Luruaco, el carro en el que viene se accidenta. Luego de 6 horas llegan los reactivos y cuando abren la nevera en el laboratorio USB esta tiene una temperatura de 35°C. ¿Utilizaría esos reactivos? ¿por qué? ¿Qué tanta potencia cree que tendrán estos?

No utilizaría los reactivos porque se han expuestos a condiciones de temperatura que no son adecuadas para estos tipos de anticuerpos, que se deben conservar a bajas temperaturas, disminuyendo su potencia.

Conclusión

 En base al resultado de la practica realizada sobre titulación, no fue posible reportar la titulación 1/32 y 1/34 porque se obtuvo un resultado 0+, con un botón brillante en el fondo que indica hemolisis, no se validan estos dos resultados.

La causa posible ante este resultado se le atribuye a presencia de agua en los tubos, o inserción de las mismas provenientes de los guantes del operador en el momento del pipeteo

 La titulación del antisuero A fue de (1/256) 3+, este resultado demuestra que el reactivo conserva su potencia y avidez siendo óptimo para utilizarlos en el laboratorio.

 En el control de calidad de células se agregaron antisueros de especificidad conocida a las células problema obteniendo 4+ para antisueros A y AB, esta reacción se da gracias a la unión del antisuero a su célula específica, se validan los resultados.

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