CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

OBJETIVOS.

• Conocer la técnica de cromatografía.
• Separar e identificar los pigmentos de nuestra muestra.
• Conocer los distintos métodos de cromatografía.
• Determinar el Rf de los compuestos.
• Conocer como los diferentes tipos de fase móvil y estacionaria afectan o benefician el procedimiento.

OBSERVACIONES

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Al colocar la columna tuvimos que cuidar que el algodón que introducimos hasta la base de esta, no fuera tan delgado ni grueso, esto con el fin de que el goteo de la bureta no fuera demasiado rápido ni demasiado lento.

Cuando se comenzó a empacar la columna tuvimos problemas ya que al momento de verter la mezcla de sílice gel y acetato de etilo: hexano, no adicionamos la suficiente cantidad de mezcla liquida lo que ocasionó que la sílice se cuarteara. Debido a esto tuvimos que sacar la sílice de la bureta para volver a repetir el procedimiento de empacado. Si hubiéramos trabajado con nuestra sílice agrietada la cromatografía no hubiera sido homogénea. En este proceso se debe de cuidar que el disolvente siempre quede ligeramente arriba de la sílice para evitar que esta se seque y agriete.

Después de tener nuestra columna muy bien empacada procedimos a colocar 10 gotas de nuestro concentrado de espinaca sobre un papel filtro y lo introducimos en nuestra bureta.

Al abrir la llave de la bureta los pigmentos fueron penetrando la sílice y comenzaron a separarse, fuimos agregando poco a poco nuestra primera mezcla de disolventes, para que se fuera desarrollando nuestra cromatografía, recolectamos en tubos las diferentes fracciones coloridas.

Al notar que aún había pigmentos que no salían con nuestra primer mezcla de disolventes, procedimos a cambiar nuestra fase móvil por acetato de etilo: metanol, recogimos la siguiente fracción hasta notar que ya no había presencia de pigmentos en la columna.

        CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.

En una cromatoplaca marcamos cuidadosamente nuestros bordes donde se colocarían nuestras  muestras, con un capilar colocamos en 3 puntos equidistantes la fracción más colorida y otra menos colorida de la separación anterior y en el otro punto colocamos la muestra original. Dejamos secar y procedimos a introducir nuestra cromatoplaca en una fase móvil de acetato de etilo: etanol 7:3 teniendo cuidado de que el ascenso de la fase móvil la cámara se tapa mientras que los disolventes ascienden por capilaridad, comienzan a eluir y mover diferencialmente a los componentes de la mancha.

Sacamos nuestra cromatoplaca antes de que la fase móvil llegara hasta la parte superior. Dejamos secar y procedimos a marcar los diferentes pigmentos que aparecieron para después realizar nuestros cálculos y calcular los valores de Rf.

RESULTADO: para obtener el Rf del compuesto se utiliza la fórmula:[pic 1]

                            Rf:   [pic 2]

 [pic 5]

ANÁLISIS DE RESULTADOS

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