Cuantificación del Felodipino y Bisoprolol en suero por HPLC/UV en fase reversa
Enviado por Jessica Gutierrez • 9 de Junio de 2021 • Informes • 944 Palabras (4 Páginas) • 109 Visitas
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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
Desarrollo analítico
Cuantificación del Felodipino y Bisoprolol en suero por HPLC/UV en fase reversa
Grupo: 1801
Integrantes:
Gutiérrez Díaz Jessica Margarita
Asesores:
- Vicente Jesús Hernández Abad
- José Ignacio Vázquez Olvera
Propiedad | Felodipino | Bisoprolol |
Peso molecular | 384.26 g/mol | 325.45 g/mol |
Solubilidad | Prácticamente insoluble en agua, soluble en diclorometano, acetona, metanol, DMF | Soluble en etanol |
log P | 3.86 | 2.15 |
pKa | pKa=5.07 | pKa= 9.57 |
Estructura molecular | [pic 3] | [pic 4] |
Características fisicoquímicas del Felodipino y Bisoprolol
Preparación de la muestra:
Existen dos métodos para el análisis de fármacos en suero o sangre, la extracción liquido-liquido o la extracción por precipitación de proteínas. El solvente juega un papel vital en una extracción, este afecta significativamente la eficiencia de extracción por lo tanto deben tenerse en cuenta algunos criterios importantes en la extracción con solventes, tales como mayor densidad, inmiscibilidad en agua y mayor solubilidad para los analitos. En este caso como ambos fármacos tienen un coeficiente de partición entre 1 y 3 se sabe que se distribuyen preferentemente en las bicapas lipídicas por lo tanto son hidrófobos, de tal manera que se puede hacer una extracción de cada uno de los fármacos con disolventes orgánicos pero esto no asegura en su totalidad que se quedaran en mayor cantidad en la fase orgánica por la fuerte unión a proteínas, por lo que el mejor método para la extracción es la precipitación de las proteínas plasmáticas.
Preparación del Felodipino en suero:
Para aislar el analito de la muestra es necesario hacer una extracción con acetonitrilo para la precipitación de proteínas. Para este fin, es necesario pipetear la muestra de suero en un tubo, y añadir solución del estándar interno de Nimodipina, agitar la mezcla a velocidad media durante 1 minuto. Para precipitar las proteínas agregar 0,1 ml de acetonitrilo, seguido de centrifugación a 5000 rpm a temperatura ambiente durante 15 minutos. Además, el sobrenadante se filtra a través de un filtro de 0,45 µm, adicionar a la muestra buffer de fosfatos pH 4,8, e inyectar en el cromatógrafo
Preparación del Bisoprolol en suero:
De igual manera para la precipitación de las proteínas se haría el tratamiento con acetonitrilo; se agrega al tubo con suero 0.1 ml de acetonitrilo, agitar la mezcla durante un minuto y centrifugar a 5000 rpm durante15 minutos, filtrar el sobrenadante a través de un filtro de nylon de 0.45 µm, posteriormente se evapora a sequedad al vacío a 45ºC, reconstituir el residuo en 100 ml de fase móvil (MeOH:THF:buffer, 65:5:30), centrifugar a 2800 rpm durante 5 minutos, inyectar una alícuota de 50 µL del sobrenadante en el cromatógrafo.
Parámetro o condición del método | ¿Por qué? | Consecuencia o resultado esperado |
Extracción con acetonitrilo | Para precipitar a las proteínas | Aumentar el rendimiento de extracción del fármaco. |
Centrifugación | Para separar por completo las proteínas | Separación de dos fases |
Filtración del sobrenadante con membrana de nylon | Para asegurar que ninguna proteína quedo dentro de la muestra | Muestra libre de proteínas |
Temperatura 30 °C | Para asegurar la estabilidad de la muestra | Cuantificación correcta del analito sin perdidas por degradación de la muestra |
Fase móvil para Felodipino, acetonitrilo: buffer fosfatos pH 4.8 (25:75 v / v) | Para obtener un tiempo de retención de 5 minutos | Cromatogramas resueltos, buena resolución |
Detector de UV, longitud de onda λ 360 para Felodipino | Se sugiere utilizar un detector U.V. debido a que todas las moléculas a analizar presentan absorción a la luz U.V., y la longitud de máxima absorción del fármaco es la indicada | Presencia del pico debido a la respuesta producida por la presencia del fármaco y del estándar interno |
Estándar interno, Nimodipino | Para observar la retención del sistema | Presencia de dos picos resueltos, que demostraran la selectividad |
Fase estacionaria C 18 (250x4 mm tamaño de partícula 5µm) | Octadecil-silano es adecuado para compuestos ácidos, neutros y ligeramente básicos | Se retendrá en la columna, resolución y forma de pico adecuada |
Fase móvil para Bisoprolol, MeOH:THF:buffer de fosfatos pH 2.6 | Para obtener un tiempo de retención de 5.8 minutos | Cromatogramas resueltos, indicador de una buena resolución del sistema |
Longitud de onda λ 225 para Bisoprolol | Porque a esa longitud de onda absorbe la molécula | Presencia del pico debido a la respuesta producida por la presencia del fármaco y del estándar interno |
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