DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES POR LA TÉCNICA DE MILLER (DNS)

DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES POR LA TÉCNICA DE MILLER (DNS)

INTRODUCCIÓN

Hoy en día la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de métodos analíticos para la determinación azúcar y alcohol en los licores y/o bebidas a utilizar como medio de venta. Uno de los métodos más acordes y con mejor resultados en la determinación de los azucares con carácter reductor, es el método (DNS), método que ha sufrido varias modificaciones a través de los años para adecuarse al análisis de diferentes materiales y su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un método espectrofotométrico; el procedimiento se basa en una reacción rédox que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores presentes en la muestra, sin embargo a nivel industrial no es recomendable utilizarlo cuando dicha trata sustancias tales como mieles y caldos de fermentación que lo contengan, esto debido a según estudios realizados en la materia, a los altos niveles de dispersión. El presente practica desarrollara el procedimiento respectivo para la determinación de azucares reductores a partir de una solución patrón de glucosa de concentración 5g/L, que permitirá realizar y ajustar una curva de calibración, y una solución desconocida; por el método del ácido 3,5 dinitro salicílico (DNS).

OBJETIVO

Desarrollar el procedimiento respectivo para la determinación de azucares reductores a partir de una solución patrón de glucosa, que permitirá realizar y ajustar una curva de absorbancia, por el método del ácido 3,5 dinitro salicílico (DNS).

MARCO TEÓRICO

Se desarrolla un procedimiento para determinar la concentración los azucares que poseen extremos carbonilos fácilmente oxidables (azúcares reductores) por el método del ácido 3,5 dinitro salicílico (DNS

El DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. La sacarosa es un disacárido no reductor, pero tras su hidrólisis en medio ácido se liberan glucosa y fructosa que sí son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por métodos espectrofotométricos es proporcional a la concentración de sacarosa.

Otros métodos de determinación de carbohidratos son: Fehling, Benedict, Somogy, Lane-Enyon, Hagerdorn-Hensen, etc., pero todos ellos se basan en el mismo principio:

Todos los azúcares con un grupo aldehído libre o un grupo cetónico se clasifican como azúcares reductores y se transforman fácilmente en enedioles (reductonas) al calentarlos en soluciones alcalinas; dichos enedioles son altamente reactivos y se oxidan fácilmente en presencia de oxígeno u otros agentes oxidantes, por lo tanto, los azúcares en solución alcalina rápidamente reducen iones oxidantes como Ag+, Hg+, Cu2+ y Fe(CN)63- y los azúcares se oxidan formando mezclas complejas de ácidos. Esta acción reductora es la que se utiliza tanto en las determinaciones cualitativas como cuantitativas.

El método DNS es aplicable a todos los procedimientos de sistemas de cultivos de medios líquidos y sólidos cuya molécula de sustrato sean azúcares reductores como glucosa, xilosa, entre otros con la ventaja de que es simple, la coloración final desarrollada es estable durante 24 hrs, sensible y adaptable durante la manipulación de un gran número de muestras a la vez. Es útil en la determinación de azúcares reductores en solución.3

METODOLOGÍA

EQUIPOS REACTIVOS

12 tubos de ensayo 15 x 150ml con rosca Matraz aforado

1 pipeta de 10 ml Solución DNS

1 termómetro 100°C Solución de tartrato de sodio y potasio 40%

1 micropipeta 1-1000µl Solución de glucosa 5g/L

Parrilla termo agitadora DNS

2 pipetas de 1ml fenol

Espectrofotómetro Sulfito de sodio

1 piceta Hidróxido de sodio

1 jeringa Agua

1 vaso de precipitado de 250ml

1 -. Utilizando la solución de DNS previamente preparado, medios 1ml, 1.5ml, 2ml, 0.5ml, 0.25 en los tubos de ensaye llevándolos a 3ml.

2.

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