Determinación cuantitativa de la actividad enzimática de un preparado enzimático puro

.UNIVERSIDAD POLITÉCNICA ESTATAL DEL CARCHI [pic 1]

INDUSTRIAS AGROPECUARIAS Y CIENCIAS AMBIENTALES

CARRERA DE ALIMENTOS

ANÁLISIS DE ALIMENTOS II  

Integrantes: Juliana Chamorro- Jennifer Ganán- Jefersson Moncayo- Antonio Pilatuña-   Daisy Pucachaqui.

Práctica Nº: 2                                                

Docente: Dra. Jenny Yambay                        

Semestre: 5to “B”

Fecha: 14-05-18

Tema: Determinación cuantitativa de la actividad enzimática de un preparado enzimático puro.

Resumen

        El presente informe se refiere a la determinación cuantitativa de la actividad enzimática de un preparado enzimático puro, teniendo como objetivo realizar una curva de calibración para determinar la concentración de almidón residual que queda en el tubo problema. Por lo cual se hace uso de la siguiente metodología; se preparó 6 tubos de ensayo enumerándolos del 0 al 5 y se colocó en cada tubo la cantidad de soluciones indicadas, una vez adicionado todas las soluciones en los tubos, se tiene un color azul oscuro es decir a mayor cantidad de almidón, mayor intensidad de color, por ello se procede a llevar en orden las  muestras al espectrofotómetro, con una longitud de onda de 550 nm para obtener la absorbancia y transmitancia. Finalmente se procedió a realizar la curva de calibración para determinar la cantidad de almidón residual, dando como resultado la ecuación  y un coeficiente de determinación de 0,992; esta ecuación sirve para  determinar la concentración final y así calcular el almidón residual, por lo tanto los datos obtenidos en el espectrofotómetro no fueron los valores deseados pero si los valores adecuados para formar la recta y obtener la ecuación. El valor residual se dio en el tubo problema, ya que el almidón y la enzima reaccionan entre si dejando una [Almidón] residual, la cual no fue detectada por distintos factores, dando como resultado 1,35 ppm, este valor establece cuantitativamente la actividad enzimática de un preparado enzimático puro, teniendo en cuenta que una elevada temperatura produce un cambio de conformación de la enzima y esta enzima pierde la actividad enzimática y por tanto no degrada completamente al almidón.[pic 2]

Palabras Claves: Curva de calibración, espectrofotómetro, residual.

Introducción

El presente informe se refiere a la determinación cuantitativa de la actividad enzimática de un preparado enzimático puro, en base a este tema se puede definir la enzima como un catalizador biológico, por ello las enzimas son proteínas altamente especializadas que catalizan numerosas reacciones en los sistemas biológicos. Una propiedad importante es su especificidad a la hora de reaccionar con sustratos, acelerando determinadas reacciones químicas en disolución. Las reacciones bioquímicas a muy altas velocidades, no se consume durante la reacción y en general presenta un elevado grado de especificidad.

La cantidad enzimática se produce a cierta velocidad de reacción bajo determinadas condiciones es decir esa velocidad de reacción se expresa como la cantidad de  sustrato transformado en cierto tiempo. La medida de actividad enzimática es de importancia para la investigación y análisis de proteínas. La característica principal de la actividad enzimática es modificar las velocidades de la reacción directa e inversa en la misma proporción, por lo que no alteran la constante de equilibrio de la reacción, disminuyen la energía de activación.

Las reacciones químicas pueden llevarse a cabo con o sin la ayuda de catalizadores, está reacción química en contacto físico con los reactivos, acelera, induce o propicia dicha reacción sin actuar en la misma, de esta manera la reacción es catalizada. La velocidad de las reacciones enzimáticas depende de varios factores, dentro de los que destacan el pH del medio de reacción, la temperatura, la concentración de sustrato y de enzima, entre los más importantes se encuentran:

Concentración de sustrato: A mayor concentración de sustrato, a una concentración fija de las enzimas se obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración de sustrato no tiene efecto en la velocidad de reacción.

Concentración de enzimas: Cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración de enzima aumenta la velocidad enzimática hasta cierto límite.

Temperatura: Un incremento de 10°C duplica la velocidad de reacción, hasta ciertos límites. El calor es un factor que desnaturaliza las proteínas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiado, la enzima pierde su actividad.

pH: La actividad de las enzimas depende de la concentración de iones hidronio del medio, ya que esto afecta el grado de ionización de los aminoácidos de la proteína, incluyendo a los del sitio activo, del sustrato o del complejo enzima-sustrato.

Sin embargo se ha propuesto  la Curva de calibración para determinar la concentración de una sustancia [Almidón] en varias muestras, sobre todo en disoluciones, para lo cual se utilizó el  método de espectrofotometría el cual se basa en la relación proporcional entre la concentración y una determinada señal analítica y sirve específicamente para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones.

Por lo anterior mencionado el problema se enfoca en la determinación de la cantidad de almidón que no reacciono en la reacción química en presencia de catalizador puro (papaína) esta es una mezcla compleja de enzimas es una proteasa sulfhídrica que tiene la capacidad de hidrolizar los enlaces peptídicos donde los residuos de aminoácidos aromáticos del grupo carbonil son arginina, lisina o glutamina.  Las reacciones químicas pueden llevarse a cabo con o sin la ayuda de catalizadores, pero el poder catalítico de las enzimas es sorprendente. Las enzimas tienen la capacidad de catalizar reacciones químicas de manera muy específica; es decir, su intervalo de acción se limita a un determinado tipo de compuesto que debe reunir ciertas características estructurales para que pueda ser utilizado como sustrato. El objetivo de este informe es realizar una curva de calibración para determinar la concentración de almidón residual que queda en el tubo problema.

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