Discusión, practica 5. Pruebas bioquímicas de identificación bacteriana

Discusión, practica 5. Pruebas bioquímicas de identificación bacteriana. segunda parte.

En esta práctica se realizaron las siguientes pruebas bioquímicas: descarboxilacion de la ornitina y de la lisina, prueba de la ureasa, prueba de rojo de metilo y Voges Proskauer y prueba de citratos.

La descarboxilación de la ornitina permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina. Esta prueba ayuda a diferenciar los géneros Enterobacter (+) de Klebsiella (-) (Villarreal & Gómez, 2017). Esta prueba se hizo en el medio de cultivo MIO este medio como su nombre lo indica sirve para observar la movilidad, la produccíon de indol y descarboxilación de la ornitina. La movilidad se detectará por la presencia de turbidez alrededor del punto deinoculación. El indol se formará si la bacteria tiene la capacidad de producir la enzima triptofanasa que desdoblará el aminoácido triptófano en indol, ácido pirúvico y amonio. El indol es incoloro, pero al reaccionar con el reactivo de Kovacs que se adiciona despues de que creció la bacteria, dará un color rojo violeta. Por lo que respecta a la descarboxilacíon de la ornitina como el medio tiene purpura de bromocresol y una pequeña cantidad de glucosa cuando esta se fermenta se produce un color amarillo en el fondo, sin embargo, al descarboxilarse la ornitina se produce putresina la cual es alcalina y sobre pasala acidez dada por la fermentación de las glucosas resultando en un color morado en el fondo.  Las bacterias que se utilizaron fueron P. mirabilis y Klebsiella de las cuales P. mirabilis resulto ser positiva ya que esta bacteria tiene actividad enzimática con la ornitina descarboxilasa. La prueba de descarboxilasion de lisina se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo de producir una enzima que descarboxila el aminoácido lisina (Sanchez, 2015). Se utilizaron las bacterias E. coli, Salmonella y P. mirabilis de los cuales E.coli y Salmonella spp. dieron resultados positivos ya que ambas son enterobacterias y tienen actividad con la enzima lisina descarboxilasa, además Salmonella es fermentadora de lactosa. La prueba de la ureasa ayuda en la diferenciación eidentificacion de los generon Klebsiella (+) de Escherichia (-). Dicha prueba sirve para determinar la capacidad de un m.o. para producir la enzima ureasa, la cual hidroliza la urea por rompimiento de los enlaces carbono-nitrógeno de esta diamina, formándose como productos CO2 y amoniaco, esto conduce a un medio alcalino (Villarreal & Gómez, 2017). Las bacterias que se utilizaron para esta prueba fueron Proteus y E. coli de los cuales Proteus dio positivo ya que es productor de la enzima ureasa. Las pruebas de rojo de metilo y Voges Proskauer Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo de fermentar la glucosa con producción de ácido por la vía ácido mixta o con producción de un producto final neutro (acetoína) por la vía butanodiólica (MacFaddi, 2003).

La prueba roja de metilo y Vogues-Proskauer son dos pruebas en una. Las bacterias que siguen principalmente la vía de fermentación ácidos mixtos a menudo producen suficiente ácido para mantener un ph menor de 4.4. A uno de los tubos se le añade unas gotas (4-5) de solución indicadora de Rojo de Metilo. Se agita para homogeneizar y se observa la coloración. Se considera positiva si vira al rojo y negativa si permanece amarillo. Se utilizaron E. coli y Klebsiella en la prueba de rojo de metilo las cuales dieron positivo. En la prueba de VP se utilizó E. coli y B. subtilis. Pero en esta parte de la práctica se cometió un error al elegir el reactivo indicado para esta prueba por lo que nuestras bacterias no tuvieron una reacción esperada. Pero según Villarreal & Gómez, 2017 “los microorganismos positivos desarrollaran un color rosa en la superficie del medio después de 30-60 minutos, el cual se extiende hacia el fondo del medio en el tubo.” E. coli debió haber salido positivo para esta prueba ya que es una enetrobacteria. Para finalizar, la prueba de citratos esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales amónicas inorgánicas como única fuente de nitrógeno, provocando la alcalinización del medio.
El medio a utilizar es agar Citrato de Simons, que contiene citrato de sodio, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador de pH. Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con el metabolismo del citrato, generará una fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de color del mismo de verde a azul. Se utilizaron las bacterias E. coli y Klebsiella de las cuales solo Klebsiella ya que esta bacteria puede metabolizar el citrato.

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