Expresion MICA-B

La expresión de MICA, MICB y NKG2D en células de cáncer de cuello uterino y mielomonocítica leucémicas humanas

Benny Weiss-Steider , Isabel Soto-Cruz , Christian A Martínez-Campos y Jorge Flavio Mendoza-Rincon *

• *Autor para correspondencia: Jorge F Mendoza-Rincon jflavio.m @ gmail.com

Afiliaciones de los autores

Laboratorio de Oncología Molecular. Unidad de Diferenciación Celular y Cáncer. FES-Zaragoza, Universidad Nacional Autónoma de México. Ciudad de México. 09230. México

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Journal of Experimental e Investigación Clínica del Cáncer de 2011, 30 : 37 doi: 10.1186/1756-9966-30-37

La versión electrónica de este artículo es el que completa y se puede encontrar en línea en:http://www.jeccr.com/content/30/1/37

Recibido: 26 de enero 2011

Aceptado: 10 de abril 2011

Publicado: 10 de abril 2011

© 2011 Weiss-Steider et al; licenciatario BioMed Central Ltd

Este es un artículo Open Access distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Reconocimiento ( http://creativecommons.org/licenses/by/2.0 ), que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original es debidamente citados.

Abstracto

Fondo

Las células cancerosas son conocidos para secretar las moléculas de tensión MICA y MICB que activan la citotoxicidad por linfocitos y células NK a través de su receptor de NKG2D como un mecanismo de defensa inmunológica. Se realizó este trabajo para evaluar si las células cancerosas también pueden expresar este receptor como posibles mecanismos de agotamiento de las moléculas MIC y por lo tanto interferir con su reconocimiento inmunológico.

Métodos

Leucemia mielomonocítica (TPH-1 y U-937) y el cáncer de cuello uterino (CALO y INBL) líneas de células fueron evaluadas por Western Blot, ELISA, citometría de flujo e inmunocitoquímica para evaluar su capacidad de expresar y secretar MICA y MICB y ser inducidos a proliferar por estas moléculas, así como para expresar su receptor NKG2D. El análisis estadístico se realizó mediante ANOVA de dos vías para el tiempo de análisis y la prueba t de Student para la comparación entre grupos. Los valores se consideraron significativamente diferentes si p <0,05.

Resultados

THP-1 y T-937 producen y secretan el estrés MICA y MICB como se muestra por Western Blot de células lisadas y por ELISA de sus medios acondicionados. Por Western blot y citometría de flujo, se encontró que estas células también expresan el receptor NKG2D. Cuando THP-1 y U-937 se cultivaron con MICA y MICB recombinante que mostraron una inducción dependiente de la dosis para su proliferación. CALO y INBL también producen MICA y MICB y fueron inducidas a proliferar por estas moléculas de estrés. Por Western blot, citometría de flujo e inmunocitoquímica también encontró que estas células expresan NKG2D.

Conclusiones

Nuestro nuevo da como resultado que las células tumorales pueden secretar simultáneamente moléculas MIC y expresar su receptor, y para ser inducida para la proliferación por estas moléculas de estrés, y que las células epiteliales tumorales también puede expresan el receptor NKG2D que se pensaba que era exclusiva de NK y los linfocitos citotóxicos es discutida como un posible mecanismo de evasión inmunológica y de la inducción del crecimiento tumoral.

Fondo

NKG2D es un miembro de la familia NKG2 de I receptores lectina tipo C HLA de clase y se expresa como un homodímero de las células NK [ 1 , 2 ] y linfocitos citotóxicos[ 3 , 4 ]. Los ligandos para NKG2D incluyen la clase humana moléculas I-como la mica y MICB[ 5 ], que son moléculas inducidas por el estrés expresados por los tumores de origen epitelial[ 6 , 7 ], y leucemias[ 8 ], así como por las células infectadas por virus[ 9 , 10 ]. El reconocimiento de la MICA y MICB ligandos en las células tumorales por el receptor NKG2D, que se encuentra en las células NK, induce la actividad citotóxica de las células NK[ 11 ] y la posterior lisis de sus dianas tumorales[ 12 ]. La secreción de MICA y MICB por las células de cáncer se ha sugerido como un mecanismo de escape inmune de las células tumorales a través de la saturación de los receptores de NKG2D sobre las células citotóxicas[ 13 , 14 ], abrogando así su capacidad de reconocer las células tumorales. De hecho, altos niveles de estas moléculas se encontraron en los sueros de pacientes humanos con cáncer[ 15 ], y una correlación directa entre el aumento fue encontrado concentraciones séricas de estas moléculas y el estadio tumoral[ 16 ].

No se sabe si la secreción de MICA y MICB por las células tumorales tiene ningún efecto sobre las propias células cancerosas. Este trabajo se llevó a cabo para determinar si dos líneas celulares leucémicas mielomonocíticas humanos, THP-1 y U-937, producen MICA y MICB y expresar NKG2D, y si estas moléculas de estrés inducen la proliferación celular. Con el fin de determinar si estas propiedades son compartidas por otros tumores, también se analizó la CALO y líneas celulares de cáncer INBL humanos epiteliales del cuello uterino.

Métodos

Células y anticuerpos

El THP-1 líneas de células U-937 y se adquirieron de ATCC (American Type Culture Collection), mientras que CALO y INBL se establecieron en nuestro laboratorio [ 17 , 18 ]. Las células se cultivaron a 37 ° C con 5% de CO 2 en medio RPMI-1640 (Invitrogen) suplementado con 10% de FCS inactivado por calor (Hyclone), 1 mM piruvato de sodio MEM de solución, 2 mM-MEM aminoácidos no esenciales solución (Gibco), 0,1 mM L-glutamina, penicilina y estreptomicina 100-U/ml 100-μg/ml (Gibco). Anticuerpo policlonal contra MICA / MICB y monoclonal murino anti-MICA, MICB y anti-anticuerpos anti-NKG2D se compraron de R & D Systems.

Los ensayos de proliferación

U-937 y THP-1, así como Caló y INBL, las células se colocaron en placas a 5 × 10 3 células por pocillo en placas de 96 pocillos. Las células se trataron con diferentes concentraciones de cualquiera de MICA o MICB durante 72 h a 37 ° C con 5% de CO 2 en medio RPMI-1640

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