Fraccionamiento De Tejidos

1. Introducción

Debido a las diferencias químicas que existen entre las moléculas, carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, estos presentan diferente solubilidad en ácido tipo tricloroacético (ATA), según temperatura y en solventes orgánicos ; luego es posible utilizar estas características para descomponer los tejidos y separa dichos biocompuestos toda vez que han sido triturados y se han roto sus membranas celulares.

El ácido tricloroacético (ATC) (Cl3CCOOH) a baja temperatura, actúa de diferente forma sobre cada biocompuesto. Sobre Carbohidratos, a baja temperatura los monosacáridos son estables en medio ácido, mientras que en caliente, sufren deshidratación produciéndose frutales. Los polisacáridos en medio ácido sufren hidrólisis del enlace glucosídico, reacción que aumenta su velocidad a medida que se eleva la temperatura. A temperaturas inferiores a 4°C su velocidad es tan lenta que para fines prácticos se considera que no ocurre. En general se dice que los carbohidratos son solubles en solución de ATA al 20% a temperaturas inferiores a 4°C y que no sufren cambios químicos en estas condiciones.

Sobre lípidos: Por definición éstos compuestos son poco solubles en soluciones acuosas, por lo tanto no se extraen si se trata el tejido con soluciones acuosas de ATC.

Sobre proteínas: Estas forman sales insolubles en ácidos como el ATC y el perclórico y por tanto no son solubles en soluciones de ATC al 20% en frío.

Sobre los ácidos nucléicos: Al igual que las proteínas, éstos ácidos son insolubles en soluciones frías de ATC. Además el DNA se encuentra unido a proteínas como las histonas, lo cual lo hace mas insoluble en estas condiciones.

En conclusión, al tratar un tejido animal previamente triturado con ATC al 20% y a 4°C y someter a centrifugación la suspensión resultante, en el sobrenadante se separan los azúcares, mientras que los lípidos, proteínas y ácidos nucleícos quedan en el residuo.

El etanol- éter- cloroformo (2:2:1) (V/V): Si el residuo de la extracción con ATC a 4°C se trata con una solución de etanol- éter- cloroformo, al solvente solo pasan lípidos, mientras que las proteínas y los ácidos nucléicos quedan en fase sólida.

Cloruro de sodio al 10% en caliente:, Si el residuo anterior se suspende en una solución de NaCl al 10% y se somete a baño de maría (92°C) durante 40 minutos, desnaturalizan las proteínas mientras que los ácidos nucléicos, principalmente el RNA queda en solución. Por lo tanto, con éste procedimiento es posible separar las proteínas de los ácidos nucléicos y si al sobrenadante se le agrega etanol absoluto en un volumen igual al doble de la solución original y se enfría e un baño de hielo durante 10 minutos, se obtiene un precipitado que puede ser separado por centrifugación y que contiene los ácidos nucléicos.

2. Objetivo(s)

• Emplear solucionas diferenciales y métodos de centrifugación para el fraccionamiento de un tejido animal en sus principales compuestos constitutivos.

• Caracterización de las biomoléculas constitutivas de los tejidos de acuerdo a sus propiedades químicas.

• Cuantificación de las biomoléculas constitutivas de los tejidos por gravimetría.

• Comparar los diferentes tejidos desde el punto de vista de sus componentes principales.

3. Justificación o Resumen

El tema en el laboratorio fue de Tejidos Animales, se hizo la práctica con la piel de pollo, para así poder extraer los lípidos, las proteínas, los ácidos nucleicos y glucógenos. Se aplicaron una serie de sustancias se llevo a centrifugación la cual permitió separar las biomoleculas dejarlas en una caja de Petri llevarlas al horno y por ultimo esperar a secarlas para así poder notar bien cada biomolecula, las cuales pesamos e iniciamos nuestra tabla de resultados comparándola con los demás resultados de nuestro compañeros y asi poder llegar a una conclusión. nos dimos cuenta que en la piel de pollo el numero de Proteínas es mucho mayor que el de los otros compuestos y por el contrario de lípidos fue muy bajo, los ácidos nucleicos y los glucógenos fueron estables quizás fue porque en los lípidos no tomamos toda la sustancia y esto provoco que el resultado fuera nivel bajo o que simplemente en la piel de pollo no hay tantos lípidos como proteínas como puede que en otra piel se encuentren mas lípidos y menos proteínas, todo varia dependiendo del tejido escogido. Este laboratorio fue una iniciativa para así poder concluir nuestro tema poder pasar de la teoría practica y asi mismo facilitar nuestro aprendizaje haciendo conclusiones discutiendo el tema basándonos de libros, u otras fuentes que nos permitieron así llegar a la elaboración de este informe.

4. Desarrollo* o Metodología

Proceso de Centrifugación:

La centrifugación es un proceso de separación, que utiliza la acción de la fuerza centrifuga para promover la aceleración de partículas en una mezcla de solido-liquido. Dos fases claramente distintas se froman en el recipiente durante este proceso.

Sedimento:

Generalmente no tiene una estructura uniforme.

El centrifugado o el Concentrado que es líquido flotante.

A menudo claro, algunas veces nublado, debido a la presencia de partículas coloidales muy finas que no se depositan fácilmente. Sin embargo puede también contener varias fases si el líquido intersticial de las mezclas contiene el elemento con diversas densidades, tales como aceites por ejemplos.

Biomoleculas:

Aquella organización molecular que integra la materia viva como un criterio quimico donde se puede clasificar en varias:

o Biomoleculas Inorgánicas.

o Biomoleculas Orgánicas.

Reactivo:

Es una sustancia que interactúa con otra dándole lugar a otras sustancias y algunas propiedades como la caracterización y la clasificación.

Lípidos:

Son biomoléculas orgánicas formadas básicamente por carbono e hidrógeno y generalmente también oxígeno; pero en porcentajes mucho más bajos.

Proteínas:

Son macromoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las biomoléculas más versátiles y más diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo.

Carbohidratos:

Son uno de los principales componentes de la alimentación. Esta categoría de alimentos abarca azúcares, almidones y fibra.

Glucógeno:

Es un polisacárido de reserva energética formado por cadenas ramificadas de glucosa; es insoluble en agua, en la que forma dispersiones coloidales. Abunda en el hígado y en menor cantidad en los músculos, así como también en varios tejidos.

5. Resultados (Solo para informes de práctica o laboratorio)

1. Grupo 2 : tejido (piel de pollo).

2. Cortar una fracción de aproximadamente 2gr y disgregar en pedazos pequeños con

Bisturí

3. Tomar el peso húmedo en balanza analítica (aproximadamente 2gr)

• Peso en la balanza analítica del tejido

4.Pasar el tejido mortero adicionar 1,5ml de ATA al 10% y macerar

5. Pasar el tejido macerado a un tubo (1) para centrifuga y centrifugar a 1000 rpm durante 8 minutos

6. Marcar, pesar de Petri en balanza analítica

CAJA DE PETRI PESO

Proteínas 450000 g

Lípidos 427988 g

7. tomar la fracción soluble o sobrenadante en otro (2) de centrifuga ; dejar el sedimento (proteínas lípidos y ácidos nucleicos

8: Al tubo (2) se le agrega el doble de etanol al 95 % enfriar a 4 grados C/5 minutos luego secentrifuga a 5000 rpm durante 8 minuto

8. El proceso de centrifugación se obtiene el sobrenadante: los monosacáridos + oligosacáridos

Del insoluble se obtiene el glucógeno. Luego se llevan a sus respectivas cajas de Petri y de allí al horno

Monosacárido en caja de Petri lleva al horno

9. con la fracción insoluble de tubo (1) (1,5ml) se agregan 3ml de etanol –eter-clororobico .Se mezclan y luego se centrifuga a 25000rpm durante 5 minutos

10.

3 ml de etanol –eter -clorobico

Fracción insoluble del tubo

11. del proceso de centrifugación se obtiene lípidos, sobrenadante ( se elimina el reactivo en el contenedor 1) sedimento (proteínas + ácidos nucleicos)

Lípidos se llevan ala caja de Petri correspondiente y luego al horno

Sobrenadante (se elimina)

Proteínas y acido nucleico

12. los lípidos se llevan ala caja de Petri de allí al horno : el sobrenadante se elimina y al insoluble ( proteínas y ácidos nucleicos )se le agrega 2ml de NaCl al 10% se mezcla se lleva a baño de maria a 90 grados (C) durante 5 minutos

13 . luego se centrifuga a 800rpm durante 8 minutos , de este proceso se obtienen los acidos nucleicos ( que se eliminan en el contenedor 1) , las proteínas que se llevan ala respectiva caja de Petri y luego al horno

Acido nucleico(se elimina en el contenedor 1)

Proteinas

12. Análisis de resultados

BIOCOMPUESTO PESO CAJA PETRI PESO CAJA PETRI CON BIOCOMPUESTO PESO NETO DEL BIOCOMPUESTO

MONOSACARIDO, OLISACARIDO No Apareció La Caja

POLISACARIO, GLUCOGENO No Apareció La Caja

PROTEINAS 45.5000 45.6444 =

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