Fraccionamiento De Tejidos

1. Introducción

Debido a las diferencias químicas que existen entre las moléculas, carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, estos presentan diferente solubilidad en ácido tipo tricloroacético (ATA), según temperatura y en solventes orgánicos ; luego es posible utilizar estas características para descomponer los tejidos y separa dichos biocompuestos toda vez que han sido triturados y se han roto sus membranas celulares.

El ácido tricloroacético (ATC) (Cl3CCOOH) a baja temperatura, actúa de diferente forma sobre cada biocompuesto. Sobre Carbohidratos, a baja temperatura los monosacáridos son estables en medio ácido, mientras que en caliente, sufren deshidratación produciéndose frutales. Los polisacáridos en medio ácido sufren hidrólisis del enlace glucosídico, reacción que aumenta su velocidad a medida que se eleva la temperatura. A temperaturas inferiores a 4°C su velocidad es tan lenta que para fines prácticos se considera que no ocurre. En general se dice que los carbohidratos son solubles en solución de ATA al 20% a temperaturas inferiores a 4°C y que no sufren cambios químicos en estas condiciones.

Sobre lípidos: Por definición éstos compuestos son poco solubles en soluciones acuosas, por lo tanto no se extraen si se trata el tejido con soluciones acuosas de ATC.

Sobre proteínas: Estas forman sales insolubles en ácidos como el ATC y el perclórico y por tanto no son solubles en soluciones de ATC al 20% en frío.

Sobre los ácidos nucléicos: Al igual que las proteínas, éstos ácidos son insolubles en soluciones frías de ATC. Además el DNA se encuentra unido a proteínas como las histonas, lo cual lo hace mas insoluble en estas condiciones.

En conclusión, al tratar un tejido animal previamente triturado con ATC al 20% y a 4°C y someter a centrifugación la suspensión resultante, en el sobrenadante se separan los azúcares, mientras que los lípidos, proteínas y ácidos nucleícos quedan en el residuo.

El etanol- éter- cloroformo (2:2:1) (V/V): Si el residuo de la extracción con ATC a 4°C se trata con una solución de etanol- éter- cloroformo, al solvente solo pasan lípidos, mientras que las proteínas y los ácidos nucléicos quedan en fase sólida.

Cloruro de sodio al 10% en caliente:, Si el residuo anterior se suspende en una solución de NaCl al 10% y se somete a baño de maría (92°C) durante 40 minutos, desnaturalizan las proteínas mientras que los ácidos nucléicos, principalmente el RNA queda en solución. Por lo tanto, con éste procedimiento es posible separar las proteínas de los ácidos nucléicos y si al sobrenadante se le agrega etanol absoluto en un volumen igual al doble de la solución original y se enfría e un baño de hielo durante 10 minutos, se obtiene un precipitado que puede ser separado por centrifugación y que contiene los ácidos nucléicos.

2. Objetivo(s)

• Emplear solucionas diferenciales y métodos de centrifugación para el fraccionamiento de un tejido animal en sus principales compuestos constitutivos.

• Caracterización de las biomoléculas constitutivas de los tejidos de acuerdo a sus propiedades químicas.

• Cuantificación de las biomoléculas constitutivas de los tejidos por gravimetría.

• Comparar los diferentes tejidos desde el punto de vista de sus componentes principales.

3. Justificación o Resumen

El tema en el laboratorio fue de Tejidos Animales, se hizo la práctica con la piel de pollo, para así poder extraer los lípidos, las proteínas, los ácidos nucleicos y glucógenos. Se aplicaron una serie de sustancias se llevo a centrifugación la cual permitió separar las biomoleculas dejarlas en una caja de Petri llevarlas al horno y por ultimo esperar a secarlas para así poder notar bien cada biomolecula, las cuales pesamos e iniciamos nuestra tabla de resultados comparándola con los demás resultados de nuestro compañeros y asi poder llegar a una conclusión. nos dimos cuenta que en la piel de pollo el numero de Proteínas es mucho mayor que el de los otros compuestos y por el contrario de lípidos fue muy bajo, los ácidos nucleicos y los glucógenos fueron estables quizás fue porque en los lípidos no tomamos toda la sustancia y esto provoco que el resultado fuera nivel bajo o que simplemente en la piel de pollo no hay tantos lípidos como proteínas como puede que en otra piel se encuentren mas lípidos y menos proteínas, todo varia dependiendo del tejido escogido. Este laboratorio fue una iniciativa para así poder concluir nuestro tema poder pasar de la teoría practica y asi mismo facilitar nuestro aprendizaje haciendo conclusiones discutiendo el tema basándonos de libros, u otras fuentes que nos permitieron así llegar a la elaboración de este informe.

4. Desarrollo* o Metodología

Proceso de Centrifugación:

La centrifugación es un proceso de separación, que utiliza la acción de la fuerza centrifuga para promover la aceleración de partículas en una mezcla de solido-liquido. Dos fases claramente distintas se froman en el recipiente durante este proceso.

Sedimento:

Generalmente no tiene una estructura uniforme.

El centrifugado o el Concentrado que es líquido flotante.

A menudo claro, algunas veces nublado, debido a la presencia de partículas coloidales muy finas que no se depositan fácilmente. Sin embargo puede también contener varias fases si el líquido intersticial de las mezclas contiene el elemento con diversas densidades, tales como aceites por ejemplos.

Biomoleculas:

Aquella organización molecular que integra la materia viva como un criterio quimico donde se puede clasificar en varias:

o Biomoleculas Inorgánicas.

o Biomoleculas Orgánicas.

Reactivo:

Es una sustancia que interactúa con otra dándole lugar a otras sustancias y algunas propiedades como la caracterización y la clasificación.

Lípidos:

Son biomoléculas orgánicas formadas básicamente por carbono e hidrógeno y generalmente también oxígeno; pero en porcentajes mucho más bajos.

Proteínas:

Son macromoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las

...