Fundamentos de la tinción Gram

La tinción gram es un método muy utilizado en la identificación de bacterias, dado que, según las características presentes en dichos organismos, se obtendrán resultados diversos. Así, es posible clasificar las bacterias en gram positivas o gram negativas dependiendo del resultado obtenido: las bacterias gram positivas adoptarán un color azul, contrario al rojizo de las gram negativas.  

En un primer lugar se realiza un frotis bacteriano que será depositado en un portaobjetos que, a continuación, se calienta ligeramente para fijar la muestra al cristal. Posteriormente, se añade cristal violeta durante un minuto para después lavar el exceso con agua destilada. Luego, se agrega lugol a la muestra y se deja reposar hasta que es necesario aclarar la muestra de nuevo, añadiéndose además alcohol o acetona para eliminar todo resto del primer colorante. Antes de añadir el último reactivo, se lava el alcohol con agua destilada y justo después se procede a teñir la preparación con safranina durante un minuto, antes de volver a deslavar con agua destilada. Una vez el proceso ha sido completado, se procede a la observación de las bacterias a través de un microscópico óptico.  

Sin embargo, ¿por qué las bacterias gram positivas adoptan un tono azulado mientras las gram negativas se vuelven rojas? La respuesta se encuentra en su morfología: como se observa en el esquema, las bacterias gram positivas cuentan con una pared de peptidoglucanos mucho más gruesa que las gram negativas, de manera que cuando se van añadiendo reactivos penetran con mayor facilidad en las segundas. De esta forma, se comienza añadiendo cristal violeta, que atraviesa las envolturas celulares para acumularse en el citoplasma, y, más tarde, lugol, que reacciona con el cristal violeta formando un complejo insoluble en las bacterias gram positivas debido que la pared celular de estos microorganismos contiene ARN en forma de ribonucleato de magnesio. Así, cuando se añade el alcohol, el cristal violeta no se extrae de la bacteria y esta se colorea de un tono azulado, a no ser que el contacto con el alcohol se prolongue demasiado; en ese caso las bacterias gram positivas se volverían incoloras. Sin embargo, como las bacterias gram negativas no contienen ribonucleato de magnesio, la mezcla de lugol y cristal violeta no es insoluble, por lo que reaccionan al alcohol eliminándose el cristal violeta y decolorando el citoplasma bacteriano, que volverá a teñirse, esta vez de color rosa, con el colorante de contraste safranina.  

Por otra parte, se ha llegado a demostrar a nivel experimental que, si el ribonucleato de magnesio se extrae de las bacterias gram positivas a través de sales biliares, se transforman en gram negativas. Una vez se devuelve el ribonucleato, las bacterias regresan a su estado natural. No obstante, el proceso inverso no es posible.  

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