GUIA DE LABORATORIO PRACTICA Nº 4. RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

UNIVERSIDAD DE SUCRE

FACULTAD DE INGENIERIA

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA AGRICOLA

PROGRAMA DE INGENIERIA AGRICOLA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA APLICADA

              GUIA DE LABORATORIO PRACTICA Nº 4

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

INTRODUCCION

Los carbohidratos hacen presencia en los diferentes sistemas biológicos como integrantes estructurales y se pueden metabolizar o almacenar para la obtención de energía química. La estructura química indica la presencia de carbono, hidrógeno y oxígeno en una relación de 1:2:1; además, se pueden representar en su fórmula química general como (CH2O)n y se caracterizan por ser moléculas con el grupo funcional aldehído o cetona. Los carbohidratos se clasifican como monosacáridos y sus derivados, oligosacáridos y polisacáridos, lo cuales pueden ser identificados cualitativamente por diferentes ensayos y determinar su poder reductor por el grupo carbonilo que tienen en su molécula. Entre los métodos cualitativos se pueden citar las pruebas de Fehling, Tollens, Benedict, Barfoed, Seliwanoff, Bial (Orcinol-HCl), Lugol, Osazonas, Molisch, etc.

OBJETIVOS

• Identificar la presencia de carbohidratos de origen vegetal.
• Cada grupo elabora los objetivos específicos y los presenta al inicio del laboratorio.

HIPOTESIS

Cada grupo elabora la hipótesis correspondiente y la presenta al inicio del laboratorio.

MATERIALES, REACTIVOS y EQUIPOS

• POR GRUPO

• 3 Pipetas graduadas de 1, 2 y 5 ml.
• 5 tubos de ensayo por grupo.
• 1 pinza para tubos de ensayo.
• 1 Beaker de 500 ml.
• 1 Gradilla para los tubos de ensayo.
• Cronómetro

• DE USO COMÚN

• 4 placas de calentamiento para el experimento.
• Soluciones al 2% de Glucosa, fructosa, maltosa, lactosa y sacarosa
• Reactivos de Molisch.
• Solución de Benedict.
• Reactivos de Fehling A y B        
• Solución de Seliwanoff
• Reactivo de Tollens
• Reactivo de Bial        
• Ácido sulfúrico concentrado, [H2SO4].

PROCEDIMIENTOS

1. PRUEBA DE MOLISCH

• Marque 5 tubos de ensayo: Glucosa, fructosa, sacarosa, extracto de jugo y agua.
• Coloque 1 ml de cada solución de carbohidrato y 0.2 ml del reactivo de Molisch Disolver 100 g de α-naftol en 1000 ml de alcohol etílico 95% v/v).
• Adicione cuidadosamente por las paredes del tubo sin agitar, 1 ml de [ácido sulfúrico].
• Mire la interface entre los dos líquidos y escriba los resultados de cada tubo de ensayo.

1. PRUEBA DE FEHLING

• Marque 5 tubos de ensayo: Glucosa, fructosa, lactosa, sacarosa y extracto de jugo.
• Deposite 1 ml de cada solución de carbohidrato y 0.5 ml de cada solución de Fehling (Reactivo de Fehling A y B).
• Caliente en baño de maría a ebullición durante 3 minutos.
• Observe y escriba los resultados de cada tubo de  ensayo.

1. ENSAYO DE SELIWANOFF

• Marque 3 tubos de ensayo: Glucosa, fructosa, sacarosa y extracto de jugo.
• Coloque 0.5 ml de cada solución de carbohidrato y 0.5 ml del reactivo de Seliwanoff (Disolver 0.5 g de resorcinol en 330 ml de HCl concentrado y diluir con agua destilada hasta 1 litro).
• Introduzca los tubos en baño de maría a ebullición durante 2 minutos.
• Observe y escriba los resultados de cada tubo de ensayo.

1. REACTIVO DE TOLLENS

• Marque 5 tubos de ensayo: Glucosa, fructosa, lactosa, sacarosa y extracto de jugo.
• Coloque 2 ml de reactivo de Tollens en cada uno de los tubos de ensayo anteriores.
• Agregue de 5 a 10 gotas a cada tubo de los carbohidratos mencionados.
• Coloque los tubos en un baño d agua a 50°C a 60°C, agite en forma suave durante el calentamiento (5 a 10 minutos)
• Un espejo de plata en el fondo en el tubo indica una respuesta positiva.
• Los tubos de ensayo se limpian con ácido nítrico para destruir el espejo de plata.

1. ENSAYO DE BIAL

• En tres tubos de ensayo agregue aproximadamente 1 ml de la muestra glucosa, fructosa, pentosa a 2.0 ml de reactivo de Bial (Disuelva 3.0 g de orcinol en 1 litro de [HCl] y añadir posteriormente FeCl3 1% p/v).
• Caliente hasta ebullición. Si se observa un color azul verdoso indica una respuesta positiva.
• Enfríe el tubo, luego agregue 2 – 3 ml de alcohol amílico y agite.

1. ENSAYO DE BENEDICT (OPCIONAL)

• Marque 5 tubos de ensayo: Glucosa, fructosa, lactosa, sacarosa y extracto de jugo.
• Coloque 1 ml de cada solución de carbohidrato y 0.2 ml del reactivo de Benedict.
• Caliente en baño de maría a ebullición durante 3 minutos.
• Observe y escriba los resultados de cada tubo de ensayo.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el fundamento de cada uno de los ensayos utilizados para la identificación de carbohidratos?
2. ¿Por qué se considera reductor un azúcar?
3. Escriba la reacción de cada una de las pruebas efectuadas en la práctica.
4. ¿Por qué no se deben tirar las sales de plata al drenaje?
5. ¿Qué sucede en cada tubo de la prueba de Fehling?
6. ¿Para qué clase de azúcares se utiliza el reactivo de Fehling?
7. ¿Qué coloración da la prueba positiva del reactivo de Fehling?
8. ¿Qué diferencia existe entre la prueba de Fehling y la de Molisch?
9. ¿Qué pruebas positivas dan los carbohidratos reductores?
10. ¿Qué es lo que hace que un carbohidrato sea reductor?
11. Mencione al menos cinco carbohidratos reductores
12. ¿Cómo se puede distinguir en el laboratorio la glucosa de la fructosa?
13. ¿Cómo se reconoce en el laboratorio la sacarosa?
14. ¿La sacarosa es un azúcar reductor? ¿Por qué?

RAMON LOZADA DEVIA

QUIMICO M.Sc.

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