Homogeneización, cromatografía y centrifugación

INTRODUCCIÓN

Las investigaciones bioquímicas estudian las sustancias que comprenden la materia de los organismos vivos, es decir biomoléculas.en está área se estudian a detalle una o todas las sustancias que participan en un sistema biológico.El tipo de moléculas que se analizan presentan ciertas propiedades que dificultan su estudio. Poseen características fisicoquímicas muy similares, son difíciles de fraccionar y purificar que otras sustancias de bajo peso molecular, además son inestables a ciertos valores de pH, temperatura y a cambios de solventes.

El desarrollo de nuevos y mejores métodos e instrumentos de laboratorio, que se puedan utilizar en análisis cualitativos, cuantitativos o para el aislamiento de diversas substancias.

Los objetivos básicos de un análisis bioquímico son:

Separación. El componente a investigar se separa primero como parte de una fracción subcelular (homogeneización, ruptura o lisis celular.) Esta fracción se procesa para lograr el aislamiento del componente. Esta etapa presenta dificultad, porque la mezcla contiene una gran diversidad de substancias, y muchas de ellas con características similares.

Purificación. Se realiza en varias etapas del esquema de fraccionamiento de la investigación. Se puede realizar demostrando que no existen otras sustancias contaminantes.

Identificación o caracterización. Determina las propiedades fisicoquímicas y biológicas que distinguen a la sustancia en el estudio.

Determinación de la estructura y correlación con la función. Requiere de la determinación completa de la forma y estructura total,se debe correlacionar las características estructurales específicas con las actividades bioquímicas

Mantenimiento de la integridad estructural y funcional. Consiste en tomar precauciones para asegurar que las sustancias, no se expongan a procedimientos extremos que puedan dañar su estructura y por tanto sus propiedades biológicas.

Existen diversas técnicas para el manejo y análisis de las muestras, de acuerdo a sus características específicas .

Homogeneización

es el rompimiento de membranas para liberar el contenido celular,el método para realizar la homogeneización depende de la textura del tejido que puede ser blando,semi blando o semiduro y duro

para el tejido blando se ocupa un homogeneizador de émbolo (potter), para el semi blando o semiduro es mejor usar un homogeneizador mecánico como lo es el Virtis y para los tejidos duros es recomendable usar el mortero y un solvente para facilitar el proceso

existen otras técnicas de homogeneización como lo son el choque osmótico que consiste en variar la concentración de una solución,o la sonicación que funciona en base a vibraciones.

En la práctica homogeneizamos hojas de espinaca,que son un tejido duro ,por lo que usamos un mortero y agregamos etanol.

Centrifugación

es un método de separación de sólidos y líquidos mediante el uso de la fuerza centrífuga,en este método interviene la masa,la densidad y el tamaño de partícula ya que se forma una “pastilla”, que contiene las sustancias de mayor peso,y un sobrenadante que está formado por las de menor peso.

existen diferentes tipos de centrifugación como son:

*diferencial-que consiste en en la diferencia de densidad de las sustancias

*Isopícnica-Se emplean medios de distinta densidad para separar partículas con el mismo coeficiente de sedimentación.

*Zonal-se emplea la diferencia en la velocidad de sedimentación de las sustancias para separarlas en un tiempo de centrifugación determinado

*ultracentrifugación-su potencia permite la separación de moléculas y sustancias subcelulares

En esta ocasión utilizamos la centrifugación diferencial

Cromatografía

La cromatografía es un tipo de técnica aplicada para la separación de varios elementos que conjugan a una mezcla, esta división se fundamenta en las características físicas y químicas que posea cada elementos, haciendo énfasis en la capacidad de interacción de cada componente de la mezcla o de la solución con una sustancia.

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