REPORTE DE LA PRÁCTICA “HOMOGENEIZACIÓN, CENTRIFUGACIÓN Y CROMATOGRAFÍA"
Enviado por alejandramgs • 11 de Marzo de 2022 • Informes • 1.410 Palabras (6 Páginas) • 491 Visitas
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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO[pic 2]
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN DE BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA
BIOQUÍMICA GENERAL
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REPORTE DE LA PRÁCTICA
“HOMOGENEIZACIÓN, CENTRIFUGACIÓN Y CROMATOGRAFÍA"
Bioquímica General Laboratorio
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Homogeneización, centrifugación y cromatografía | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
OBJETIVO GENERAL: APLICAR MÉTODOS DE HOMOGENEIZACIÓN, CENTRIFUGACIÓN, ASÍ MISMO LA SEPARACIÓN A UNA MUESTRA BIOLÓGICA (HOJA DE ESPINACA), TANTO POR CROMATOGRAFÍA EN PAPEL COMO EN COLUMNA PARA PODER OBTENER PIGMENTOS VEGETALES Y PODER IDENTIFICARLOS. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
Cromatografía de pigmentos de espinaca
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Tabla II. Cromatografía en columna de pigmentos de espinaca
Tabla III. Cromatografía en capa fina de pigmentos de espinaca.
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DISCUSIÓN DE RESULTADOS: HOMOGENEIZACIÓN
El etanol es un solvente que permite extraer los pigmentos de la espinaca por la solubilidad de estos aparte de que los pigmentos clorofila-a y clorofila-b son solubles en este y el alcohol etílico permite que en la cromatografía de papel y capa fina estos se separen de los demás colores y no asciendan con los colorantes apolares Los pigmentos clorofílicos son insolubles en el solvente universal llamado agua. Pero sí son solubles (afinidad química) en solventes orgánicos como por ejemplo alcohol etílico y acetona. CENTRIFUGACIÓN
En el momento que la centrífuga empieza trabajar esta alcanza 2500 rpm por minuto en las cuales si esta no se encuentra nivelada en todos sus lados con el mismo peso puede provocar que los tubos se rompan o incluso la misma centrífuga
[pic 11] Precipitado: Es la parte en la que terminan las partículas con mayor densidad esta parte se encuentra en el fondo del tubo de ensayo. Sobrenadante: En esta parte se encuentra el solvente etanol y los colorantes disueltos en este la clorofia-a clorofila-b, xantofila, carotenos .
CROMATOGRAFÍA ¿Qué cuidados se deben tener en el montaje y realización de la cromatografía en columna? Se debe prevenir que la fase móvil se seque de la superficie, dejando expuesto la fase estacionaria e incluso el solvente. La muestra debe añadirse de manera lenta y cuidadosa. En la cromatografía en papel ¿por qué debe saturarse la cámara cromatográfica (vaso) durante 10 minutos? explique La cámara se mantiene cerrada para que su atmósfera se sature en los vapores del eluyente con el objetivo de facilitar su ascenso, evitando pérdidas por evaporación y manteniendo un flujo regular. ¿Por qué el nivel de la mezcla de solventes no debe rebasar el punto de aplicación de la muestra en la cromatografía en papel y en gis? Fundamente Porque la muestra en vez de subir por la fase móvil se esparcirá en la mezcla de solventes contaminandolo. ¿Hubo algún cambio en el orden de desplazamiento o elución de los pigmentos entre las diferentes cromatografías? Si, no. Explica y fundamenta tu respuesta Si, a diferencia de la cromatografía en papel y columna, la cromatografía en capa fina tuvo una alteración en el orden, esto se debe a un cambio en la composición, la fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar. Haciendo que esta cromatografía sea en fase reversa. Escribe la estructura de cada uno de los pigmentos y con base en ella explica su interacción con la fase móvil y la fase estacionaria Las hojas de espinaca poseen β-caroteno y clorofila como principales componentes responsables del color de las mismas y cantidades menores de xantofilas. El β-caroteno tiene color amarillo, mientras que la clorofila tiene coloración verde, presentado dos variedades la a y la b que difieren en que la tiene un grupo metilo la b un grupo formilo en el anillo de porfirina. La pérdida del ion Mg++ en las clorofilas conduce a la formación de feofitina (a y b). Por otro lado, las xantofilas son una familia de compuestos, derivados de los carotenos con átomos de oxígeno en la estructura y que en la hoja de espinaca se encuentran en menor proporción que β-carotenos y clorofila.[pic 12] ¿Cuál fue el objetivo de utilizar diferentes tipos de cromatografía para una misma muestra? ¿Cuál es la diferencia de utilizar una u otra? La versatilidad de las técnicas cromatográficas genera un sin número de condiciones experimentales, que pueden depender de las características de cada muestra. Es por ello que se identifica como un área de oportunidad la posibilidad de establecer procesos generales para el análisis de los cambios conformacionales y estabilidad de la muestra. El fin de utilizar una misma muestra, es poder observar y analizar el comportamiento de dicha muestra frente a distintos tipos de eluyentes de acuerdo a la cromatografía que se realizó. Eluyentes polares: Arrastran más eficazmente los compuestos más retenidos en la fase estacionaria. Eluyentes menos polares: Arrastran muy lentamente a los compuestos. En la CCF solo se pudieron apreciar 3 pigmentos diferentes, a diferencia de la de papel, en la que se pudieron distinguir 4 pigmentos. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CONCLUSIONES Enunciando el objetivo general se obtuvo la ruptura de los pigmentos de espinaca a través de la homogeneización y una posterior separación de tales pigmentos de acuerdo a su densidad por medio de la centrifugación, así mismo se demostró que la cromatografía en capa fina sirve para separar los componentes de la mezcla, en este caso, separamos los pigmentos de la espinaca, tales como la clorofila a, clorofila b, xantofilas y carotenos. El proceso de separación de cada sustancia es el resultado de un equilibrio entre dos conjuntos de fuerzas contrapuestas: las de propulsión promovidas por el flujo de la fase móvil y las fuerzas de retención, originadas por la fase estacionaria. De este modo, cada sustancia migra de forma diferencial, de acuerdo a sus propiedades físicas y al tipo de polaridad que tome con respecto a las fases. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
REFERENCIAS
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