Informe Tincion De Gram

Microbiología de los alimentos

Informe de laboratorio

Tinción de Gram

Nombre: Camila Retamal Olave

Fecha: 2 de septiembre del 2014

Profesora: Beatriz Hernández

Ramo: microbiología de los alimentos

OBJETIVOS:

a. Reconocimiento de bacterias gram positivas y gram negativas mediante la técnica de coloración diferencial.

b. Identificar la morfología (cocos, estreptococos, staphilicocos, bacilos, etc.)

c. Diferenciar las diferentes formas de las bacterias y su ambiente

d. Utilizacion de técnicas sencillas para la observación de microorganismos

e. Conocer o aprender manejo del microscopio óptico para la observación de bacterias

Introducción

La tinción de Gram es uno de los métodos de mayor importancia y relevancia que se emplean en el laboratorio de Microbiología. Esta tinción constituye un tipo de tinción diferencial puesto que clasifica las bacterias en dos grandes grupos: gran positivas y gran negativas en virtud a la coloración que éstas desarrolle y la coloración dependerá de la diferencia constitutiva en la estructura de la pared celular de las bacterias.

Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes

celulares de las bacterias: Gram positivas y Gram negativas

La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de

peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más enla superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína). Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que esel material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas.

• MATERIALES Y REACTIVOS:

 Cultivo bacteriano

 Láminas portaobjetos

 Asa de siembra

 pinzas para láminas

 Mechero

 Alcohol acetona

 Microscopio

 Aceite de inmersión.

 Agua destilada

 Goteros

 Microscopio

 Colorantes:

 La tinción gram se utiliza en estricto orden:

* Cristal violeta al 1% y al 10%

* Lugol

* Alcohol

* Safranina al 1% y al 10%

Procedimiento

1 Con la ayuda de un mechero flamear la asa de sembra y esperar que se enfríe un poco.

2 Realizar un extendido delgado de la muestra con un asa de sembra sobre un

portaobjetos y secar.

3 Fijar el material a estudio a la placa pasándola 2 o 3 veces por la llama de un

mechero evitando el calentamiento excesivo.

4 Colocar la placa sobre un soporte y cubrirla con el colorante

cristal violeta durante 1 minuto

5 Lavar con agua corriente.

6 Cubrir la placa con el mordiente lugol durante 1 minuto.

7 Lavar con agua corriente.

8 Cubrir la placa con el decolorante alcohol acetona durante 5 segundos.

9 Lavar con agua corriente.

10 Cubrir la placa con el colorante safranina durante 1 minuto.

11 Lavar con agua corriente.

12 Dejar secar al aire.

13 Observar al microscopio con aceite de inmersión, objetivo 100X, condensador

abierto totalmente.

Tinción

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