Informe laboratorio 3

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Universidad Andrés Bello

Facultad de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Biología Celular

Profesores: Daniela Elizondo Muñoz.

                   Giorgia Ugarte Marin.

TRABAJO PRÁCTICO N°1:

Microscopía II

BIO131

                                                                                   Autores: Javiera García Hermosilla

                                                                                                Tomás Olguín Solís

                                                                                                 Diego Vergara Ossandón

                                                                                   Fecha de entrega: 21 septiembre 2015.

                                                                                   Curso:       Laboratorio biología celular.

                                                                                   Sección: 5

                                                                                   Grupo: N°2

Introducción

Desde los inicios de la humanidad han sido fundamentales los descubrimientos y la evolución de la tecnología junto a ellos, los cuales han influido en las diferentes perspectivas que se han utilizado para analizar la vida. Cada periodo ha introducido costumbres y conocimientos que han desarrollado nuevos planos para estudiarlos y definirlos. La aparición de los lentes y del microscopio, la observación de protozoos y bacterias; el desarrollo de las habilidades alcanzadas en el campo de la microscopía fueron marcando avances en el conocimiento de los organismos vivos, en la comprensión de su morfología, estructuras constituyentes, comportamiento, aspectos que hasta entonces eran desconocidos, por ser estos seres imperceptibles para el ojo humano a simple vista (1). Se alude a la microscopía en campo iluminado o claro es la más usada para la observación de frotis coloreados, para examinar características morfológicas y la movilidad de los organismos en preparaciones denominadas en fresco. Mientras tanto la microscopía campo oscuro se utiliza el mismo microscopio luminoso, empleando un condensador cuya apertura numérica es mayor que la del objetivo así bloquea los rayos de luz directos al igual que desvía la luz de un espejo al lado del condensador en un ángulo oblicuo. De esta manera se crea un campo oscuro que contrasta contra los bordes destacados de los microorganismos (2).

El microscopio ópticos no solo nos permite aumentar las imágenes de las células hasta mil veces (3), sino que también es posible medir directamente los tamaños células y estructuras (núcleo, vacuola, cloroplasto) (4) .Para conocer la envergadura de una celular es necesario poseer una reglilla ocular, esta reglilla va impresa en un disco de vidrio transparente el cual se inserta el ocular (5). La reglilla posee una escala que contiene 100 rayas sin unidades, por lo tanto previo a medir una celular hay que calibrarla.

No solo es importante conocer el tamaño celular o ver como son estas estructuras tan complejas, también es fundamental conocer el número de partículas que poseemos, para esto se utilizar una cámara de recuento de Neubauer, las cámaras de recuento se utilizan para determinar el número de partículas por unidad de volumen de un líquido. Las partículas leucocitos, eritrocitos, trombocitos, bacterias, esporas, polen etc. Se cuentan visualmente con un microscopio óptico (6).

Como hipótesis de este practico, se plantea que el cordero tendría una mayor cantidad de eritrocitos que el humano, por es un animal con una mayor actividad física que el humano.

Objetivos

1.- Observar preparaciones frescas generando un campo oscuro.

2.- Comprender la técnica de recuento de glóbulos rojos a través de la cámara de Neubauer.

3.- Determinar el tamaño celular de un frotis sanguíneo permanente.

Materiales y Métodos  

Actividad N°1: Campo Oscuro

Se preparó una muestra fresca de cabello humano, que se extrajo de un compañero de práctico. Se coloca el cabello sobre el portaobjeto, posteriormente se le agrego agua destilada y finalmente se le cubrió la muestra con un cubreobjetos. Luego se procedió a observar la muestra en un microscopio campo claro normal (a 4X, 10X, 40X). Seguidamente de observar la muestra en los cuatros aumentos señalados, se rotula la imagen que se visualiza en el lente 10 x y 40x, se escribe lo que se contempla. La segunda etapa de esta actividad consistió en añadir a la lámpara del microscopio un recorte circular de cartulina negra, del mismo diámetro que la lámpara de tal manera que la luz pase solo por los bordes del círculo. Con esta técnica se logra un microscopio de campo oscuro, se observó la muestra con el lente objetivo 4X, y se prosiguió aumentando gradualmente hasta 40X. Una vez que la muestra fue enfocada en el lente 10 y 40X, se rotuló lo observado en el campo visual y se anota lo observado. Como se poseen los dibujos ya rotulados, se analizan los bosquejos paralelamente, se escriben las diferencias entre la imagen producida por un microscopio campo claro y un microscopio campo claro y su efecto obtenido.

Actividad N°2: Reglilla

En esta actividad el encargado del laboratorio nos otorgó un microscopio que contenga una reglilla instalada en el lente ocular. Esta reglilla es un patrón grabado en el lente ocular y esta graduada en 100 rayas verticales paralelas sin una unidad de medición. Luego se calibro esta reglilla, esta se calibro usando un portaobjeto especial como patrón, que posee una lámina de vidrio en la cual existe grabada una línea graduada de 1 mm de largo. Finalmente se determinó tamaño celular promedio de un glóbulo rojo y de un glóbulo blanco en un frotis sanguíneo permanente, midiendo 3 células de cada tipo para establecer un promedio.

Actividad N°3: Determinación del número de célula

El profesor nos proporcionó una suspensión de eritrocitos, después de la entrega de la suspensión con una alícuota se retiró 1μl y se llevó a 300 ml de suero o buffer PBS, luego se agito hasta obtener una mezcla homogénea. Una vez que la cámara ya está cargada se espera un lapso de tiempo para permitir que las células sedimenten, una vez que estas sedimentan se pone la cámara cargada en la platina del microscopio. Enfoque el reticulado de la cámara, primero con el lente de menor aumento del microscopio y luego cambie al objetivo 10X y finalmente 40X. El conteo de glóbulos rojos tiene que ser en un intervalo corto de tiempo, puesto que si demora mucho en el conteo, el calor de la fuente de luz comenzará a secar el líquido dentro de la cámara, afectando el resultado. Una vez hecho el conteo se sacó el promedio de la cantidad de células por μl.

Resultados

Actividad Práctica N°1: Observación microscópica de un cabello humano en microscopio campo claro, microscopio campo oscuro y microscopio contraste de fase.

-        Título de muestra: Cabello humano

-        Tipo de muestra: temporal

-        Tinción: no presenta

-        Aumento objetivo: 40X

-        Aumento total: 400X

                       [pic 2] [400X]

Figura N°1: Cabello humano observado en microscopio campo claro.

En la figura se observa una muestra temporal de cabello humano en un microscopio campo claro con un aumento de objetivo (40X) en donde se puede observar el cabello levemente difuso y con sus bordes no definidos. Además se observan pequeñas fibras que componen el pelo.

-        Título de muestra: Cabello humano.

-        Tipo de muestra: temporal

-        Tinción: no presenta.

-        Aumento objetivo: 40X

-        Aumento total: 400X

               [pic 3] [400X]

Figura N°2: Cabello humano en microscopio campo claro adaptado a microscopio campo oscuro.

En la figura se observa una muestra de cabello humano en un microscopio campo claro adaptado a microscopio campo oscuro por un círculo negro sobre la fuente de luz. El cabello se observa con bordes más definidos, no presenta color y la imagen se ve de forma más tridimensional.

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