LABORATORIO # 1 BIOSEGURIDAD, ESTERILIZACION Y MEDIOS DE CULTIVO

LABORATORIO # 1 BIOSEGURIDAD, ESTERILIZACION Y MEDIOS DE CULTIVO

Martínez Jerónimo Yuly Yaneth, Yeison Naranjo Torres, Jhon Agudelo

Fundación Universitaria de San Gil, UNISANGIL, Facultad de Ciencias Naturales e Ingeniería

Ingeniería Ambiental

Yopal, Colombia

yulyath@outlook.com

yfnaranjo@misena.edu.co

jhagudelo8gmail.com

Resumen — 

Es necesario identificar los métodos de bioseguridad y las normas básicas de trabajo seguro en el laboratorio de microbiología.

En el siguiente informe se llevara a cabo la práctica de microbiología número 1, donde se prepararon tres medios de cultivo (Agar Plate Count, Chromocult, McConkey) con los cuales se pretende observar y entender la importancia que tienen en el aislamiento y cultivo de microorganismos.

Esto teniendo como finalidad el aspecto macroscópico de las colonias en los diferentes medios de cultivo.

Palabras clave— cultivos, agar, microorganismos, microscopio.

Abstract - In the following report was carried out practice of microbiology laboratory number 1, where is prepared three culture means (Plate Count Agar, Chromocult, McConkey) with which it intends to observe and to understand the importance that have in the isolation and culture of microorganisms.

This having as purpose the macroscopic appearance of colonies on different culture means.

Keywords – culture means, agar, microorganisms, microscope.

1. INTRODUCCION

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.

Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura

la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser Preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina, Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan sustancias específicas para crecer, Hasta el momento se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

1. MATERIALES

1. Materiales:

• Autoclave
• Espatula
• Cajas de petri
• Erlenmeyer
• Agua destilada
• Pipetas de 10 ml estérile
• Balanza

• Alcohol
• Medios de cultivo preparados
• Cinta transparente y de enmascarar.
• Frascos de vidrio boca ancha con tapa.
• Guantes desechables
• Medios de cultivo  (Agar chromocult, agar McConkey)

1. METODOLOGIA

2.1 Preparación medios de cultivo

Para una buena preparación de los medios de cultivo, fue fundamental el empleo de instrumentos de vidrio y equipos limpios, exentos de sustancias detergentes.

1. Cualquiera que fuese el medio a preparar se leyó cuidadosamente las instrucciones que aparecen en el frasco.
2. Se pesó la cantidad del medio según las cajas de Petri que se iban a preparar, el volumen de agar para cada caja de petri es de 20 ml aproximadamente.
3. Se agregó el medio pesado a un Erlenmeyer y se adiciono el volumen de agua (volumen del agua respecto a gramos de medio a preparar).
4. Se agito hasta obtener una solución homogénea y se calentó la solución hasta hervir (preferiblemente). Este procedimiento se realizó en un agitador magnético con plancha de calentamiento.
5. La esterilización puede efectuarse de diferentes maneras: por calor, por filtración o métodos químicos. El método dependerá del medio, su consistencia y componentes lábiles.
6. Generalmente en la esterilización de los medios de cultivo se emplea el calor húmedo (autoclave) con preferencia al calor seco
7. Se llevó el Erlenmeyer previamente cubierto  y marcado al autoclave por:

Tiempo: 15-30 min

Presión de vapor: 15 libras por pulgadas cuadradas (lb/in2) o 1,1 kg/ centímetro cuadrado (kg/cm2) o 1.2 atm

Temperatura: 121 °C

2.2 Esterilización con Autoclave

1. Se reconocieron las partes de un autoclave
2. Se verifico el nivel del agua de la cámara de vapor. Se cubrió completamente la rejilla.
3. Se colocaron recipientes de aluminio dentro de la cámara de vapor y en el interior del recipiente el disco difusor de vapor (disco con perforaciones).
4. Se introdujo el material a esterilizar.
5. Se colocó la tapa teniendo presente que la flecha que se encuentra en el borde de la tapa coincida con la ranura que está en el borde externo de la autoclave y además que la manguera del manómetro y conductora del vapor que está adherida a la tapa no permita el escape del vapor  y por consiguiente fracase el método de esterilización.
6. Se ajustaron las llaves que están en la tapa , por parejas, ajustando una frente a la otra, para ejercer la misma fuerza  y así permitir un cierre nivelado de la tapa evitando que se escape vapor y por consiguiente el fracaso del método de esterilización.
7. Se aplicó calor a la autoclave. En ese momento la válvula de salida de vapor  estuvo abierta y permaneció así hasta cuando el vapor desalojo el aire, lo cual se percibió cuando se produce un chorro continuo de vapor a través de la válvula.
8. Se cerró la válvula para permitir la concentración de vapor y el consecuente aumento de la temperatura y la presión, factores que fueron controlados por medio de manómetro, que se encuentra ubicado en la tapa del autoclave.
9. Se tuvieron en cuenta las condiciones establecidas que garanticen una verdadera esterilización.
10. Cumplido el tiempo de esterilización, se dejó enfriar el autoclave hasta cuando la aguja del manómetro descendió a cero.

2.3 Envase de los Medios De Cultivo

Cuando el medio de cultivo que se esterilizo estuvo a una temperatura de 45 a 42 ◦C:

• Se sirvieron 7 ml en cada uno de los tubos de ensayo estériles, haciendo uso de la pipeta estéril.
• Se sirvieron 7 ml para tubos con medio inclinado.
• Se sirvieron 20 ml (medios para cultivación) en las cajas de petri previamente estériles y se dejó solidificar.

2.4 Conservación de los medios de cultivo preparados

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