LABORATORIO #9: AISLAMIENTO DE GLUCÓGENO

Universidad Autónoma de Chiriquí

Escuela de Medicina

LABORATORIO #9: AISLAMIENTO DE GLUCÓGENO

Yina González 4-793-1669; Eliécer Guerra 4-794-1818; Stevens Sánchez 4-793-334

1-Objetivos:

Extraer el glucógeno del hígado mediante factores físicos (el calentamiento).

Comprobar la presencia del glucógeno de las muestras extraída.

2-Resumen:

El objetivo de este laboratorio era el lograr el aislamiento del glucógeno. La extracción se realizó a partir de una muestra de hígado de pollo, ya que en él los niveles de glucógenos son abundantes. Primeramente, se pesaron 50 g de hígado de pollo, luego se preparó la mezcla del hígado con 20 mL de KOH al 50%, lo calentamos por 45 minutos y luego lo dejamos enfriar; se le añadió 70 mL de agua y 70 mL de etanol frío, luego lo dejamos reposar con la finalidad de observar un precipitado, lo cual correspondía al aislamiento del glucógeno.

Posteriormente, agregamos 7 gotas de Molish (detectar la presencia de carbohidratos) y, después de pasados 5 minutos se precipitó con alcohol al 95%.

Luego se procedió a tomar una muestra de la solución con glucógeno para añadir ácido sulfúrico gota a gota por los bordes. Hasta observar el anillo rosa que caracteriza la presencia de glucógeno y se comparó con una muestra de agua y reactivo de Molish la cual no hubo presencia del anillo rosa.

3-Marco Teórico

El glucógeno (en animales, hongos y bacterias) y el almidón (en plantas) sirven de reservas de glucosa para usos metabólicos posteriores. En los animales una provisión constante de glucosa es esencial para los tejidos como el cerebro y los eritrocitos, que dependen casi por completo de glucosa como fuente de energía (otros tejidos pueden oxidar ácidos grasos para obtener energía). La movilización de la glucosa desde los depósitos, en principios el hígado proporciona un suministro constante de glucosa (-5mM en sangre). Cuando ésta es abundante, como inmediatamente después de una comida, se acelera la síntesis de glucógeno es suficiente para abastecer el cerebro con glucosa por casi medio día. Bajo condiciones de ayuno, las necesidades de glucosa de la mayor parte del cuerpo se satisfacen mediante la gluconeogénesis (literalmente, síntesis de glucosa nueva) a partir de precursores no hidratos de carbono como los aminoácidos. No sorprende que la regulación de la síntesis de glucosa, el almacenamiento, la movilización y el catabolismo por glucólisis o por la vía de pentosas esté elaborada y sea sensible a las necesidades energéticas inmediatas o a largo plazo del organismo. Voet (2009)

Los seres vivos almacenan glúcidos en forma de polisacáridos, que sirven como materiales de reserva. El almidón, la inulina en los vegetales superiores y el glucógeno en los animales. El glucógeno consta de cadena de glucosa unidas por enlaces glicosídicos α (1-4) y ramificaciones, cada 8 ó 10 unidades, de glucosa mediante enlace glicosídico α (1-6).

Figura 1. Estructura del enlace glucosídico.

El glucógeno es especialmente abundante en el hígado en donde puede ocupar hasta un 10% de su peso y en músculo, un 1%. En situación de ayuno, el glucógeno es la primera reserva que se moviliza para mantener la glucemia, al menos durante dos horas. La extracción del glucógeno del hígado de esta práctica implica un proceso de homogenización del tejido y ruptura celular, así como la extracción y la eliminación de las proteínas (desproteinizar) para evitar interferencias en los análisis posteriores. Koeppen (2010)

4-Resultados y Discusiones

En la experiencia realizada sobre el aislamiento de glucógeno, el punto principal fue la obtención del polisacárido de un hígado de pollo fresco.

Para una correcta obtención de glucógeno, se corta en trozos para aumentar la superficie de contacto y calentar para la debida homogenización de componentes celulares disueltos, formando una solución coloidal.

A través del calor ocurre: “una desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija”. Según (Guyton 2016).

Una vez homogenizado, por medio del calor y el movimiento constante en la cristalería. Se puede decir que la muestra está lista si ha pasado ya un lapso de tiempo, no más de una hora. En el que se encuentren en los recipientes proteínas, iones, componentes de las membranas celulares y glucógeno.

Podríamos también, haber utilizado el músculo del ave, para obtener el glucógeno; pero, Según (Harrison, Manual de medicina interna 2016) “El glucógeno es el polisacárido de reserva energética en los animales, y se almacena en el hígado (10% de la masa hepática) y en los

músculos (1% de la masa muscular) de los vertebrados”. Podemos argumentar que, la cantidad de glucógeno que en el hígado se guarda no es igual. Dado que es una prueba cualitativa, la cantidad de glucógeno que es despreciable.

Una vez homogenizada se mezcló con agua a temperatura ambiente y con alcohol frío. ¿Qué sucede con el alcohol frío? Resulta que el alcohol es un fijador natural precipitante, disolviendo los lípidos y precipitando proteínas. Es un medio que detiene el catabolismo celular y la acción de la ARNasas y ADNasas. Según (Guyton, Fisiología Médica, 2016).

“Todos los azúcares por acción del ácido sulfúrico concentrado se deshidratan formando compuestos furfúricos por ejemplo las hexosas son Hidroximetilfurfural. Los compuestos furfúricos reaccionan positivamente con el reactivo de Molish que contiene alfa naftol”. Según, AUNQUE (Asociacion de químicos españoles / reacciones orgánicas).

Todos los carbohidratos tanto los monosacáridos como los disacáridos y polisacáridos reaccionan con -naftol, en presencia de ácido sulfúrico para formar sustancias complejas coloreadas

La reacción ocurre de la siguiente manera según las figura 2

Figura 2. Reacción Molish, ácido sulfúrico con glucógeno

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