La mayoría de las mediciones que se hacen en un LAC de bioquímica se utiliza esta técnica
Enviado por Marco Antonio Aldana Cervantes • 7 de Noviembre de 2015 • Documentos de Investigación • 6.539 Palabras (27 Páginas) • 51 Visitas
(MESA 1) Espectrofotometría I
La mayoría de las mediciones que se hacen en un LAC de bioquímica se utiliza esta técnica. Usa radiaciones electromagnéticas que es una energía radiante que puede ser de diferentes tipos: visible, ultravioleta (UV), infrarrojos,…
La espectrofotometría es una técnica de laboratorio que utiliza la luz para medir sustancias en disolución.
Por lo tanto después de haber definido la espectrofotometría podemos decir que se fundamenta en que la luz atraviesa una dilución y al incidir sobre la sustancia sufre una modificación en la trayectoria de los rayos que se encuentra en relación con la concentración de la disolución.
La energía electromagnética se diferencia del resto de energía porque:
a) No necesita ningún soporte, se transmite incluso por el vacío
b) Se desplaza a elevadas velocidades
c) Se desplaza con movimiento ondulatorio
Esta energía está formada por fotones o corpúsculos de energía discontinuas. La energía de un fotón depende de:
a) Longitud de onda (λ): distancia entre 2 máximos de ciclo completo del movimiento ondulatorio. Se expresa en nm (10-9m)
b) Frecuencia: número de ciclos por segundo. Es inversa a la longitud de onda. Se expresa por ν. ν=c/λ ;siendo c la velocidad de la luz (300.000km/s)
; siendo h la constante de Plank (6,63·10-27)[pic 1]
Cuanta menor frecuencia tiene una onda su energía, es mayor, siendo más peligrosa. Es espectro electromagnético es el conjunto de todas las longitudes de onda de una onda. Cubre un amplio intervalo de energías radiantes. Según su λ tenemos:
Rayos gamma | Rayos X | Ultravioleta | Luz visible | Infrarrojo | Microondas |
0,1 nm | 1 nm | 180 nm | 390 nm | 750 nm | 400·103 nm |
El ojo humano responde a la radiación electromagnética entre 380 y 750 nm aproximadamente, esta puede depender de la percepción del ojo (en otras especies de animales puede variar su espectro visible)
La luz solar o la luz emitida por un filamento de tungsteno se reconoce como blanca al ojo humano.
En la región visible, la luz se descompone en colores y sus colores complementarios. Cuando la luz blanca penetra en la materia, esta se separa según su IR (índice de refracción) en las diferentes λ que la forman; unas de estas son absorbidas y otras se reflejan (complementarias). Las λ reflejadas producen los diferentes colores que apreciamos en la franja visible.
Así las λ complementarias son aquellas que unidas a las λ absorbidas nos dan luz blanca. Una luz que se ve de un color determinado al ojo humano, debe ser iluminada para mediciones fotométricas con un haz de λ que absorbe, es decir, el complementario.
1. Medición de Radiaciones en espectrofotometría
Las sustancias que empleamos son disoluciones con color y que son capaces de absorber una determinada λ; estas sustancias se llaman cromógenos. Al radiar el cromógeno se deben eliminar aquellas radiaciones que no absorba, y sólo se radia con aquella luz monocromática que sea capaz de absorber la sustancia a medir. Las radiaciones que no son de la misma λ de onda que las absorbidas por la sustancia pasaran de largo y serán recogidas por el sensor. La cantidad de luz que deja pasar va en relación con la cantidad de soluto en disolución que tenemos (concentración de cromógeno).
El aparato medirá la luz incidente, luz absorbida y luz que pasa por la materia; y con todo ello nos halla la concentración de la disolución que radiamos. El aparato, además, debe tener un selector de λ que mide las λ que no deseamos; al no ser así el detector recoge todas las λ sin diferenciarlas y mide una concentración errónea.
2. Fenómeno de interacción entre luz y materia
Cuando se produce interacción entre un haz de energía electromagnética y la materia se producen:
- Procesos de absorción: Cuando una partícula en estado de “reposo” o estado “fundamental” interacciona con un haz de luz, absorbe energía, y pasa a estado “excitado”. En la partícula se producen cambios que dependen de las características de la partícula y de la energía de la luz. La partícula en estado excitado tiende a regresar a su estado fundamental desprendiendo la energía absorbida en forma de calor.
Aº + h ·v -> A* -> Aº + Calor
El principal cambio se da por variación en la disposición de los e- que la forman. El cambio se produce mejor cuando la energía que incide es la más parecida a la que necesita para que el e- cambie de una capa a otra.
Cada especie absorbente (cromógeno) tiene lo que se llama un “espectro de absorción característico” La gráfica se suele representar en el eje de coordenadas absorbancia (ordenadas) frente a la longitud de onda (abcisas), es lo que llamamos espectro de absorción.
La medida de la cantidad de luz absorbida por una solución de una especie absorbente, es el fundamento en que se basan las técnicas de Espectrofotometría de absorción.
La máxima de absorción nos indica donde la técnica es más sensible a una determinada λ. Cuando se observa la representación gráfica del espectro se prefiere el punto más ancho para observar las diluciones sin que haya errores grandes
- Procesos de emisión: Algunos compuestos tras ser excitados, de retorno a sus estado inicial, producen una emisión de energía radiante:
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