Laboratorio de Análisis Bioquímicos Clínicos de Sistemas

Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán Departamento de Ciencias Biológicas Sección de Ciencias de la Salud Humana Licenciatura en Bioquímica Diagnóstica Clave de la carrera: 105-39

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Cuaderno de Trabajo

Laboratorio de Análisis Bioquímicos Clínicos de Sistemas Clave de la asignatura: 1849[pic 2]

Grupo:          

No. de Equipo:         

Semestre: 2021-2 .

Integrantes del equipo:         Camacho de Cristobal Joaqui        

                                        Elizalde Cardena Erick                                                                                  Villegas Solis Omar Joel[pic 3][pic 4][pic 5]

Autores:

QFB. Ma.de Lourdes Galván Ruiz

M. en C. Gloria Leticia Arellano Martínez QFB. Beatriz L. González Maldonado QFB. Maricruz Reyes Aguayo

M en C. Luis A. Gordillo Reséndiz Dra. Betsabé Rodríguez Pérez

M. en C. Heidi J. Amezcua Hempel

SEPIEMBRE, 2020

ACTIVIDADES PREVIAS A LA PRÁCTICA: ENZIMAS HEPÁTICAS

A. Investigar las funciones metabólicas de cada una de las enzimas, indicando su localización a nivel celular.

- Aspartato Aminotransferasa (AST): Cataliza la transaminación irreversible de la L-quinurenina para formar ácido quinurénico, encargado de regular el equilibrio redox del NAD intracelular, es útil para la síntesis de aminoácidos. Facilita la captación de ácidos grasos de cadena larga. Esta se encuentra en la mitocondria y en el citoplasma.

- Alaninaaminotransferasa (ALT): Cataliza la síntesis de dimetil arginina vía transaminación hacia el ácido valérico. Dimetil arginina es un inhibidor del NO, por lo que regula la presión sanguínea. Esta se encuentra en el citoplasma.

- ɣ-Glutamiltransferasa (GGT): Convierte de glutamato a glutamato 5-semialdehido, un intermediario en la síntesis de prolina, ornitina y arginina. Esta se encuentra en la membrana.

- Fosfatasa Alcalina (ALP): Hidroliza los ésteres de fosfato y un grupo orgánico, liberando fosfato al medio, esto se utiliza para la síntesis de nucleótidos y otros metabolitos fosfatados. Esta se encuentra en la membrana plasmática.

B. Anotar los principales órganos donde se localizan, en orden decreciente de importancia.

 - AST: Corazón, hígado, riñón, cerebro, próstata, esófago, etc.

- ALT: Riñón, hígado, intestino delgado.

- GGT: Duodeno, colon, tiroides, estómago, glándulas salivales, hígado, etc. - ALP: Riñón, pulmón, apéndice, hígado, etc.

C. Elaborar una tabla en donde relacionen diferentes enfermedades hepáticas con alteraciones en los niveles séricos de las enzimas que se determinarán en la práctica.

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D. Investigar las técnicas de cada prueba de acuerdo con el fundamento y marca del reactivo, esta información será proporcionada por los profesores del grupo.

- AST: Cataliza cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del aspartato al α-cetoglutarato formando glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido se reduce a malato en presencia de malato deshidrogenasa (MDH) y NADH. La velocidad de disminución del NADH+ es lo que se detecta en el espectrofotómetro y es proporcional a la actividad catalítica de AST.

- ALT: Cataliza la transferencia reversible de un grupo amino de la alanina al α-cetoglutarato formando glutamato y piruvato. El piruvato producido es reducido a lactato en presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) y NADH. La velocidad de disminución del NADH+ es lo que se detecta en el espectrofotómetro y es proporcional a la actividad catalítica de ALT.

- GGT: Cataliza la transferencia de un grupo γ-glutamilo de la γ-glutamil-p-nitroanillida al dipéptido aceptor glicilglicina. La velocidad de formación del ácido 5-amino-2-nitrobenzoico es lo que medimos en el espectrofotómetro, siendo su concentración proporcional a la actividad catalítica de GGT.

- ALP: Cataliza la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato (pNPP) a pH 10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato. La velocidad de formación del p-Nitrofenol, es lo que se determina en el espectrofotómetro y es proporcional a la actividad catalítica.

E. Con la información anterior llenar todas las tablas que aparecen en el manual de prácticas.

ACTIVIDADES PREVIAS A LA PRÁCTICA: EVALUACIÓN DEL METABOLISMO Y EXCRECIÓN HEPÁTICA

A. Realizar un esquema para describir el mecanismo de formación de las bilirrubinas directa e indirecta.

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B. Realizar una lista con los nombres de los ácidos biliares primarios y secundarios e indicar en donde se forma cada uno.

C. Investigar las técnicas de cada prueba de acuerdo con la marca del reactivo (esta última será proporcionada por los profesores del grupo).

- Bilirrubinas: La bilirrubina soluble (conjugada) reacciona directamente con el ácido sulfanílico diazotado, produciendo la azobilirrubina, dando un color rojo-violáceo que se mide en un rango de 520-580 nm. Para el caso de la bilirrubina insoluble, se usa un agente solubilizante para que se logre llevar a cabo la reacción.

- Proteínas totales: Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico en medio alcalino, produciendo un complejo violeta que se mide en un rango de 520-560 nm, y cuya intensidad es proporcional a la concentración de las proteínas totales en la muestra. Esta técnica es llamada Método de Biuret.

- Albúmina: La técnica es llamada el Método del Verde de Bromocresol y se basa en que la albúmina se une específicamente por puentes de hidrógeno con la forma aniónica del colorante Bromocresol sulfonflaleína (BCF), y en presencia del exceso del colorante se forman complejos coloridos cuya intensidad de color, que se mide en un rango de 600-650 nm, es proporcional a la concentración de la albúmina en el medio.

- Colesterol: La técnica es un método enzimático colorimétrico llamado CHOD-POD y se basa en 3 reacciones enzimáticas acopladas las cuales dan como producto final una quinonimina roja, la cual se mide en un rango de 490-550 nm.

- Triacilglicéridos: Los triglicéridos presentes en la muestra son determinados por medio de reacciones enzimáticas

DIAGRAMA DE FLUJO: ENZIMAS HEPÁTICAS

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DIAGRAMA DE FLUJO: EVALUACIÓN DEL METABOLISMO Y EXCRECIÓN HEPÁTICA

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RESULTADOS

Cálculos

Cálculos

Tabla de resultados

Nombre del paciente:Lorena García Martínez  Edad:   26 años        Sexo:        Femenino                 Horas de ayuno:NA Tratamiento:        NA                                 Diagnóstico presuntivo:                Fecha:  17-05-22                        

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