Las tinciones en bacteriología

Las tinciones en bacteriología permiten aumentar el contraste del microorganismo de interés para su visualización en microscopía, permite conocer características como:

• Forma (morfología).
• Agrupación.
• Afinidad tintorial.
• Presencia de cápsula.
• Esporas (bacterias esporuladas como clostridium botulinum o bacillus anthracis).

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Preparación de un frotis fijo.

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La mayoría de las tinciones requieren de un frotis fijo, en donde a partir de muestras de un cultivo bacteriano se busca visualizar un microorganismo de interés (generalmente en busca de bacterias patógenas).

1. En un portaobjetos limpio se marca con lápiz graso el área donde se colocará la muestra.
2. - Si se trata de un medio de cultivo sólido: usando un asa microbiológica colocar una gota de agua en el área marcada anteriormente en el portaobjetos, se esteriliza el asa usando un mechero, se espera a que se enfríe, se toma 1 colonia de cultivo y se homogeniza en la gota de agua.

- Si se trata de un medio de cultivo líquido, se esteriliza el asa usando mechero, se deja enfriar, se toma una gota del cultivo bacteriano con el asa y se extiende en el área marcada en el paso 1.

1. Se dejan secar las laminillas a temperatura ambiente.

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Tinción de gram

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Es una técnica de tinción que se usa como primer paso en la identificación de bacterias y levaduras. Divide a las bacterias en 2 tipos, gram + y gram -, esto debido a sus componentes de la pared celular, permite la observación de morfología (cocos, bacilos), tamaño, agrupación (cadenas, racimos). Hay que tener en cuenta que cuando se trata de hongos levaduriformes (levaduras) estas se teñirán gram+, no se deben confundir con bacterias puesto que las levaduras son de un tamaño considerablemente más grande.

El procedimiento tiene como precepto el uso de colorante cristal violeta o violeta de genciana (colorante primario), adicionando bicarbonato a este colorante se permite la catalización de la reacción, posteriormente se agrega una solución yodada (mordente), estos componentes se combinan con los microorganismos y se retienen en la pared celular. Posteriormente se trata con alcohol-acetona (decolorante), la pared de las bacterias gram + se deshidrata, lo que impide la salida del colorante primario (de ahí su afinidad a teñirse moradas-violetas), en el caso de las gram-, el decolorante destruye la integridad de la membrana externa, lo que permite la salida del colorante primario, en consecuencia, al agregar el segundo colorante (fucsina básica o safranina),

es incapaz de penetrar la pared celular de las gram + (quedan teñidas de color morado) mientras que en el caso de las gram – sí puede penetrar, tiñiendo a estas de color rosado.

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Corroboración de una tinción de gram.

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Se usa hidróxido de potasio al 3% (KOH 3%), este proceso consta de colocar sobre otro frotis o la tinción realizada 1 gota de KOH y con ayuda del asa microbiológica mezclar de forma gentil en

círculos, si al separar de forma lenta el asa de la solución (sobre la laminilla/frotis) se forma una hebra viscosa, se trata de bacterias gram -, si no se forma una hebra al separar se trata de gram+.

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