Bacteriologia

SUBMÓDULO:

“PROCESAR CULTIVOS BACTERIOLÓGICOS”

MATERIAL DE APOYO A PRÁCTICAS:

“BACTERIOLOGÍA”

ESPECIALIDAD: LABORATORISTA CLÍNICO

INDICE

CONTENIDO PÁG.

INTRODUCCIÓN………………………………………………………………………….1

PRÁCTICAS DE LABORATORIO:

REGLAMENTO……………………………………………………………………….…...2

1. ESTERILIZA MATERIAL……………………………………………..…….……3

2. PREPARA MEDIOS DE CULTIVO BACTERIOLÓGICO…………..….....…6

3. SIEMBRA BACTERIOLÓGICA………………………….……………..….....…8

4. REALIZA EXUDADO FARÍNGEO……………………………………....….…11

5. REALIZA COPROCULTICO……………………………………..………..…...13

6. REALIZA UROCULTIVO……………………………………………..……......15

7. REALIZA TINCIÓN DE GRAM……………………………………………...…18

8. IDENTIFICA BACTERIAS MEDIANTE PRUEBAS BIOQUÍMICA…….…..21

9. IDENTIFICA BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTE

MEDIANTE LA TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN…………………….….…..23

10. REALIZA PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA (PSA),POR DIFUSIÓN EN DISCO………………………………………........26

GUÍA DE OBSERVACIÓN……………………………………………………………..28

LISTA DE COTEJO……………………………………………………………………..29

COMPETENCIAS DEL MCC……….......................................................................30

REFERENCIAS………………………..…………………………….……………….…31

APÉNDICE……………………………..…………………….………………………….32

INTRODUCCIÓN

Las bacterias, son microorganismos procariotas que habitan por miles de especies en el cuerpo humano, algunas manteniendo una relación parasitaria sólo temporal y otras viviendo en el cuerpo humano en forma permanente. También se encuentran en el en el ambiente, agua, comida y muchas de ellas son avirulentas y otras potencialmente mortales.

En la Carrera de Laboratorista Clínico se desarrollan competencias profesionales elementales dentro del campo de la Bacteriología, como egresado de este Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de servicios No. 24, o de cualquier otro plantel perteneciente a EMS con planes y programas afines a los propósitos de esta carrera, debes estar capacitado para realizar prácticas de laboratorio llevadas a cabo de rutina en todo laboratorio público o privado.

En este material de apoyo contiene 10 prácticas como: Realizar esterilización, Elaborar medios de cultivo bacteriológico, Aislar bacterias, Realizar Tinciones diferenciales, Tinciones para BAAR, Pruebas bioquímicas, Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, así como exudado faríngeo, coprocultivo y Urocultivo, como puedes apreciar reafirmas la parte teórica vista en clase. Respecto a la práctica No. 8 de Pruebas Bioquímicas, se presenta apéndice como complemento de dicha práctica para lograr la identificación bacteriana.

Así mismo al final de este material encontrarás la guía de observación y lista de cotejo para que sea evaluado tu desempeño y productos, mismos que contribuirán al desarrollo de tus competencias genéricas, disciplinarias y profesionales.

Espero que te sea de gran utilidad este trabajo.

¡ADELANTE¡

REGLAMENTO DEL LABORATORIO

1. Es indispensable el uso de una bata blanca mientras trabajes en el laboratorio para proteger tu piel.

2. Por lo general las prácticas de biología están programadas para dos horas en laboratorio para que logres el resultado deseado.

3. sigue al pie de la letra todas las indicaciones que se te muestren en cada una de las prácticas. No olvides tener siempre cerca tu manual.

4. Haz anotaciones de cada una de tus experiencias de la práctica, ya que se te pueden olvidar al momento de dar tus resultados o reportes.

5. Se puntual a la hora indicada, diez minutos posteriores no se te permitirá la entrada al laboratorio sin falta justificada.

6. Si asistes al laboratorio: NO alterar el orden, NO fumar, NO masticar chicle, NO introducir alimentos o bebidas, NO entrar al cubículo donde se encuentra el material y sustancias.

7. Cuando realices tus prácticas, manipula con mucho cuidado el material con el cual estas trabajando, si es en el laboratorio, podrías pagarlo el que se rompa o dañe.

8. Para mejor organización en el laboratorio podrás formar equipos de trabajo y se nombrará un responsable.

9. Al terminar tus prácticas deja el material y equipo utilizado limpio y seco.

10. Acreditarás el Submódulo, si tienes un 80% de asistencia a tus prácticas.

PRÁCTICA No. 1 “ESTERILIZA MATERIAL POR CALOR HUMEDO”

INTRODUCCION.- Existen diversos métodos físicos de esterilización y de inhibición del crecimiento microbiano, como pueden ser el calor, la filtración y la radiación, pero el más ampliamente usado es el calor, ya sea húmedo ó seco, los cuales tienen diferente penetrabilidad. Conforme aumenta la temperatura por encima de la temperatura máxima de crecimiento, se producen efectos letales en los microorganismos. El calor, de cualquier forma, es utilizado extensamente como un agente letal bacteriano y se puede aplicar a numerosos instrumentos, materiales y substancias, con el propósito de matar a las bacterias que ellos contengan. Este proceso se llama “Esterilización” y al material, cultivo ó medio de cultivo sometido a éste, se le denomina entonces “Estéril”, es decir, desprovisto de toda forma viviente.

El calor puede ser generado en diversos aparatos y por lo tanto se puede esterilizar por calor húmedo y por calor seco. En ambos casos hay numerosos factores que condicionan la efectividad del proceso: Cantidad de agua, temperatura, presión, tiempo de contacto, superficie de esterilización, pH, “edad” de las bacterias, la presencia o no de esporas, composición del medio de suspensión, etc.

Las células vegetativas y las endosporas bacterianas de un mismo organismo varían considerablemente en cuanto a su resistencia al calor. La muerte de los microorganismos es más rápida a pH ácido. Las concentraciones elevadas de azúcares, proteínas o grasas disminuyen la penetración del calor y habitualmente aumentan la resistencia de los organismos al calor, mientras que las elevadas concentraciones de sal pueden incrementar o bien reducir la resistencia al calor, dependiendo del organismo.

FUNDAMENTO: La muerte de las bacterias por el calor es consecuencia de la desnaturalización de sus proteínas. Los enlaces intracelulares e intermoleculares (puentes de Hidrógeno), de las proteínas de los cuales depende su funcionalidad son más lábiles cuando las proteínas están hidratadas que cuando no lo están, de tal manera que el “calor húmedo” es más efectivo en la desnaturalización de enzimas y otros componentes proteicos importantes para la célula que el “calor seco”. Es por eso que se dice que el calor húmedo tiene mayor “penetrabilidad” que el calor seco.

2. OBJETIVO: El alumno esterilizará en autoclave material de laboratorio.

3. MATERIAL, EQUIPO Y SUBSTANCIAS:

- Autoclave. – Papel estraza

- Material de vidrio - Agua

- Cinta testigo

4. DESARROLLO:

1. Lava, seca y envuelve correctamente el material de vidrio del laboratorio que se te proporciona en tus mesas de trabajo (Cajas de Petri, Pipetas, abatelenguas etc.).

2. Esteriliza dicho material en autoclave. A continuación se te menciona como lo utilices.

MANEJO DEL AUTOCLAVE

1. Asegurarse de que haya un buen nivel de agua en la autoclave.

2. Introducir el material que se va a esterilizar procurando que quede bien colocado para evitar algún problema y cerrar la tapa ajustándola bien. Debe de quedar herméticamente cerrada.

3. Abrir la válvula de salida de vapor y encender la fuente de calor de la autoclave.

4. A medida que suba la temperatura del agua (ver el termómetro), empezará a salir una mezcla de vapor-aire por la válvula de salida de vapor, dejar que escape esta mezcla hasta que solo salga un flujo continuo de vapor y el aire haya sido eliminado.

5. Una vez purgado la autoclave, cerrar la válvula de salida de vapor y dejar que la presión suba hasta 15 libras por pulgada cuadrada (vigilar el manómetro), lo que proporciona una temperatura de 121 °C. Observar que no es la presión de la autoclave lo que mata a los microorganismos sino la elevada temperatura que puede alcanzarse cuando el vapor de agua se somete a presión.

6. En ese momento empezar a contar el tiempo.

7. Transcurridos 15 minutos a 15 libras de presión, apagar la fuente de calor y dejar que el autoclave se enfríe sólo (no abrir la válvula

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