Metabolito Secundario

AISLAMIENTO DE GÉRMENES DE UNA MUESTRA NATURAL Y DETERMINACIÓN DE UN METABOLITO SECUNDARIO

RESUMEN

ABSTRACT

INTRODUCCION

Todo material en el cual los microorganismos pueden reproducirse es un medio de cultivo. Estos medios se preparan sobre una sustancia llamada Agar que se extrae de algas marinas y que no puede ser digerida por las bacterias, pero que da una consistencia suficiente para soportar la adición de sustancias nutritivas y permitir el crecimiento bacteriano.

A este medio base se le pueden agregar nutrientes tales como:

• Peptona (Proteína que sirve como fuente de Carbono y Nitrógeno)

• Extracto de carne que proporciona proteínas y carbohidratos

• Sueros bovinos

• Sangre humana, de cordero o de otros animales

• Vitaminas

• Minerales

• Cloruro de sodio

• Colorantes que son indicadores o inhibidores

Según la consistencia, dada por la cantidad de Agar, los medios pueden ser: Sólidos, Líquidos y Semisólidos

MATERIALES Y METODOS

Aislamiento de gérmenes de una muestra natural y obtención de cultivo puro

Tomamos 0,5g de la sustancia en descomposición (limón), la diluimos en un tubo con 9ml de agua destilada, esta será nuestra muestra original. A partir de esta vamos hacer 4 diluciones en otros 4 tubos con 9ml de agua cada uno. La primera dilución es de 10−1 donde ponemos 1ml de la muestra en el primer tubo, con 1ml de esta muestra en el siguiente tubo, tenemos la dilución 10−2 y así, igual en los otros dos tubos, consiguiendo las diluciones 10−3 y 10−4.

Con cada una de las diluciones hacemos una siembra en masa para lo cual tomamos con una asa estéril y sembramos de forma estriada en el medio MYP y el Saboraud respectivamente, dejando un blanco es decir una caja sin sembrar.

Se ponen a incubar los cultivos durante 48horas a 28−30⁰C y siempre las cajas en posición invertida para que el agua de condensación caiga sobre la tapa y no sobre el cultivo, lo que podría mezclar las colonias.

Determinación de un metabolito secundario

Mediante un bioensayo en medio sólido podemos determinar si un microorganismo produce algún antibiótico capaz de inhibir el crecimiento de un organismo de prueba. Para ello se empleó el Saccharomyces cerevisiae, microorganismo que tiene la capacidad de realizar la descomposición mediante fermentación. Tomamos un tubo con medio MYP fundido mantenido a 45-50 ⁰C al cual le añadimos 1 ml de la suspensión de levadura (S.cerevisiae). Homogenizamos esta mezcla y la colocamos sobre una caja Petri. Luego que el medio se solidifique estriamos sobre este con el moho del limón (limonero). Pusimos a incubar las cajas a 28⁰C durante unas 24 horas para permitir el crecimiento del microorganismo sensible y la difusión del antibiótico.

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